论文部分内容阅读
目的:表皮生长因子受体(EGFR)已被确定为表皮生长因子家族的细胞表面受体。表皮生长因子受体的表达和活化可能导致癌症的发生。Rhomboid家族成员遍布各类生物体，在EGFR细胞内信号传递和调控中发挥了重要作用。而本文主要针对人类长菱家族基因RHBDF1表达出RHBDF1蛋白（又叫iRhom1蛋白）(Inactive rhomboid protein1)展开研究。 RHBDF1蛋白主要分布于内质网和高尔基体，而不是在细胞膜上。RHBDF1虽然不具有Rhomboid家族所具有的膜内丝氨酸蛋白酶活性，但是有数据显示，RHBDF1能够促进EGF相关配体的剪切、活化，而活化的EGF将会激活EGFR的信号通路。所以，本论文中，我们首先针对RHBDF1对表皮生长因子受体EGFR生长信号的作用展开研究。小肽VR56就是由酪氨酸RHBDF1酪氨酸848位点的片段设计而来，并通过了细胞实验证实了小肽VR56能够降低了HIF1α的稳定性，进而影响了RHBDF1原癌基因的特性。所以，本论文也将对小肽VR56进一步展开修饰研究。 结果:为了研究RHBDF1对表皮生长因子受体EGFR生长信号的作用，我们构建了肺部肺部组织高表达RHBDF1的小鼠，通过研究高表达RHBDF1的外周血和肺部组织，我们发现，肺部高表达RHBDF1小鼠外周血TGFα浓度升高，肺组织WesternBlot显示磷酸化的EGFR的表达明显升高，RHBDF1促进了TGFα的分泌，而TGFα能够激活EGFR;我们利用现有的转基因鼠构建肺癌细胞LLC-GFP肿瘤肺模型，通过这个模型，我们发现肺部高表达RHBDF1阳性小鼠原发瘤的重量高于RHBDF1阴性鼠组。 我们进一步对小肽VR56进行修饰，我们在VR56的基础先后设计和优化了VR56的剪切体小肽CR27、TR35; VR56的衍生物P-VR56;基因分析设计小肽小肽VR53等，WesternBlot和免疫荧光染色都显示小肽CR27、TR35非常明显地降低了HIF1α的表达，RT-PCR显示小肽CR27、TR35降低了VEGF的mRNA水平;VEGFELISA显示VR53明显MDA-MB231细胞在缺氧状态下VEGF的分泌。这些小肽具有与VR56相近或者更高的生物活性，为RHBDF1作为抗癌靶点的药物开发打下了基础。 结论: 1.RHBDF1通过EGFR通路促进肿瘤的生长; 2.小肽CR27、TR35、VR53等能够拮抗RHBDF1的作用。