TGF-β I型受体抑制剂SD-208对增生性瘢痕抑制作用的体内及体外实验研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lvlianpeng2009
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研究背景和目的:  增生性瘢痕是临床常见病和多发病之一,是创伤后人体自我修复过程中的异常反应,以成纤维细胞增殖失控和胶原等细胞外基质过度沉积为特征的人类真皮区特有的纤维代谢性疾病。而TGF-β1目前已知的最强的促进瘢痕增生的生长因子,它可以直接作用于成纤维细胞,促进其增殖及迁移,并且可以促进成纤维细胞合成胶原等细胞外基质,促进瘢痕内血管新生,除此之外还可抑制基质金属蛋白酶活性,通过以上作用机制导致瘢痕增生。因此,通过对抗TGF-β1成为治疗增生性瘢痕的新思路。而SD-208是由Scios INC.(Fremont,CA)人工合成的小分子化合物,其合成方便快捷,并高度特异性结合 TGF-βI型受体,本实验通过体内外实验研究新型 TGF-βI型受体抑制剂SD-208对增生性瘢痕的治疗效果及其机制。  研究方法:  1.体外实验验证SD-208对增生性瘢痕有明显的抑制作用:  取人瘢痕组织行瘢痕成纤维细胞培养,取第5代细胞进行实验干预,CCK-8试剂盒检测SD-208对瘢痕成纤维细胞增殖的影响,并根据细胞增殖实验确定SD-208最适浓度,细胞划痕及transwell实验检测 SD-208对瘢痕成纤维细胞迁移的影响,应用F-actin特异探针rhodamine-phalloidin检测 F-actin及应力纤维的改变,Western Blot检测不同实验组的Ki-67、α-SMA、Smad3、p-Smad3、CTGF、TGF-β1及I型胶原表达情况。  2.体内实验验证SD-208对增生性瘢痕有明显的抑制作用:  48只裸鼠做瘢痕模型,每只裸鼠背部接种1×1cm2人瘢痕组织,按照完全随机原则将裸鼠分为2组,每组24只,分组情况为:空白对照组、SD-2081μmol/L组。瘢痕造模成功后每日给药一次,观察并记录各组瘢痕大小变化及裸鼠体重变化,分别于给药后1、2及3周取材,免疫组化比较两组的Ki-67、α-SMA、Smad3、p-Smad3、CTGF、TGF-β1及I型胶原表达情况。  研究结果:  1.体外实验证实SD-208对瘢痕成纤维细胞的增殖及迁移有明显的抑制的作用,且SD-208可抑制F-actin及应力纤维的表达及延伸,SD-208组的Ki-67、α-SMA、3、p-Smad3、CTGF、TGF-β1及I型胶原表达低于空白对照组,且有统计学意义。  2.体内实验提示SD-208处理组瘢痕面积明显缩小,而裸鼠体重并无明显改变,免疫组化提示SD-208实验组Ki-67、α-SMA、p-Smad3、CTGF、TGF-β1及I型胶原含量下降。  研究结论:  SD-208对增生性瘢痕有明显的抑制作用,其作用机制与阻断TGF-β/Smads通路有关。
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