为建立牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus 3,BPIV3)及相关疾病病原的多重PCR检测方法,根据Gen Bank上发表的BPIV3 3种基因型病毒株的HN基因序列和牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)、牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)、BPIV3的5’UTR、g C、opp D/F、HN基因序列,分别设计了3对和4对特异性引物,优化反应体系后建立了两种多重PCR检测方法。结果表明,建立的牛副流感病毒3型3种基因型三重RT-PCR检测方法的敏感性较高,特异性强,可用于对临床样品的检测。建立的牛副流感病毒3型、牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒四重PCR检测方法具有较高的灵敏性和特异性。对临床样品的检测结果与已发表文献中PCR方法的检测结果一致。建立的多重PCR检测方法可同时对BPIV3、BVDV、IBRV、M.bovis进行检测,为这4种病原的诊断和检测提供了一种方法。同时,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对4个牧场的88份牛血清进行牛副流感病毒3型的血清学调查。结果显示,4个牧场中均有BPIV3的感染状况,且阳性率高,最高阳性率可达100%(22/22),最低阳性率为86.36%(19/22),平均阳性率高达95.45%(84/88)。