腹腔脓毒症(Abdominal Sepsis)起源于严重的腹腔感染,可由腹部疾病直接导致或继发于腹部外伤及手术并发症,其治疗的关键在于早期诊断和生理复苏、有效的感染源控制、抗生素治疗以及各种支持治疗等。其中,感染源控制主要指外科干预,是腹腔感染脓毒症治疗的核心和基石,是在多学科合作的背景下,有效控制疾病进展、改善病人预后的前提。其方式包括微创改善引流、腔镜或开腹手术治疗、腹腔开放治疗等,在治疗中应贯彻损伤控制外科(Damage Control Surgery,DCS)理念并采取创伤由轻到重的升阶梯式处理方案。然而对于部分腹腔脓毒症患者,由于存在严重的持续性或继发性腹膜炎,通过微创改善引流等常规方式难以控制感染;加之身体状况危重,使其常难以耐受时间长、强度大的确定性手术。依据DCS原则,越来越多的医师采用时间短的计划性多次手术干预,行清创、冲洗引流等损伤控制治疗,在“保命”的基础上,阶段性地从源头上逐渐控制、局限甚至治愈原发感染,有效避免患者生理及免疫潜能耗竭,从而改善生存及预后,并可于患者条件改善后行择期确定性手术以恢复生理解剖及功能。DCS指导治疗严重腹腔脓毒症,临床中已被越来越多的应用,但就其手术时机、适应症、手术技巧等尚未达成标准。对腹腔脓毒症动物模型行计划性损伤控制治疗的可行性及有效性研究,尚未见相关报道。本研究对急性腹腔脓毒症大鼠模型行计划性多次腹腔冲洗治疗,从一般表现、生存情况、炎症免疫、脏器功能等方面探究其对大鼠的影响,为相关基础研究及临床实践提供一定参考。第一部分:建立盲肠结扎穿孔大鼠腹腔脓毒症模型,从一般表现、生存情况、免疫炎症机制、器官功能等方面探讨其特点目的:用盲肠结扎穿孔法(Cecal Ligation and Puncture,CLP)建立大鼠急性腹腔脓毒症模型,(1)分析大鼠的生存情况及一般表现;(2)分析不同时间大鼠肝功能变化并行病理学检测;(3)利用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测术后不同时间血清内毒素及细胞因子TNF-α(肿瘤坏死因子-α)和IL-10(白介素-10)的变化。方法:(1)选择SPF级,8～10周龄,体重300±20g,雄性SD大鼠20只,随机数字表法分为2组(n=10),即SHAM组(假手术组)和CLP组(模型组),SHAM组只行开腹手术,CLP组利用盲肠结扎穿孔法制备腹腔感染脓毒症模型,观察两组术前术后动物模型生存情况及一般表现,计算MSS(鼠脓毒症评分);(2)另选大鼠70只,随机分为SHAM组(n=20)和CLP组(n=50)于术后不同时间点3h、6h、12h、24h、48h随机处死大鼠,下腔静脉取血,检测肝酶包括ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶),取肝脏标本行石蜡切片HE染色观察病理学改变;(3)于术后不同时间点3h、6h、12h、24h、48h处死大鼠,取血制备血清后用ELISA法行内毒素及细胞因子TNF-α及IL-10检测。结果:(1)模型建立后7天内,SHAM组全部存活,模型组24h内死亡率明显升高(70%),7天全部死亡;CLP组出现立毛、眯眼、精神不振、活动减少等表现,且随时间加重;CLP组MSS评分术后各时间点较SHAM组明显升高(P<0.05)。(2)肝功能指标ALT、AST于SHAM组中各时间变化不著,而模型组术后随时间升高,且从6h起差异显著(P<0.05);HE染色示大鼠肝脏小叶结构受损,中央静脉扩张淤血,肝脏细胞水肿、空泡样变性及溶解坏死,炎性细胞大量浸润,且随时间而呈现加重趋势。(3)相比SHAM组,CLP组内毒素水平于6h后显著升高,48h最高(P<0.05);SHAM组术后TNF-α及IL-10变化不著,而CLP组促炎因子TNF-α于6h明显升高,24h达到峰值(P<0.05);抗炎因子IL-10早期升高稍慢,于12h明显升高,且于48h达到峰值(P<0.05)。结论:CLP组术后较低的生存水平、典型的感染性休克表现,表明急性严重腹腔感染脓毒症模型建立成功;建模后生化及病理结果显示,肝脏功能持续恶化,体现了严重腹腔感染脓毒症中器官衰竭的发生过程;建模后出现炎症因子大量释放,早期以TNF-α等介导的促炎反应为主,后期则IL-10等介导的抗炎反应显著增强,这为后续的再次手术干预及免疫机制研究提供相关依据。第二部分:对脓毒症大鼠模型行计划性腹腔冲洗,在不同方面探讨其影响目的:通过对严重急性腹腔脓毒症大鼠模型行损伤控制的计划性手术治疗,探究其对生存、脏器功能及炎症免疫等方面的影响。方法:(1)选择SPF级,8～10周龄,体重300±20g,雄性SD大鼠55只,随机数字表法分为4组,即SHAM组(n=10)、CLP组(n=15)、SPL组(n=15)和MPL组(n=15),SHAM、CLP组处理同前,SPL组仅于CLP后6h行再次手术腹腔冲洗,MPL组于CLP后6h、18h、36h分别行计划性再手术冲洗腹腔。(2)观察记录各组动物模型术后生存情况。(3)于术后48h随机处死各组大鼠,下腔静脉取血,检测ALT、AST、内毒素及细胞因子TNF-α及IL-10;(4)CLP后48h取肝脏标本行石蜡切片HE染色,观察比较病理学改变。(5)CLP后48h随机处死各组大鼠(n=4),取脾脏制备单个核细胞悬液,流式细胞术检测Tregs含量。结果:(1)术后48h,SHAM组全部存活,CLP生存率26.7%,SPL、MPL组术后各时间生存情况好于CLP组,48h生存率分别为33.3%和46.7%。(2)术后48h肝功能指标ALT、AST在SHAM组中最低,CLP组中最高,MPL组相比SPL组降低更显著(P<0.05);肝脏HE染色结果表示,SHAM组基本正常,CLP组明显出现细胞坏死溶解、肝小叶结构损坏、炎症细胞浸润等表现,SPL、MPL组肝脏炎症坏死表现相比CLP组有所改善,且MPL组改善更为明显。(3)内毒素及血清细胞因子TNF-α、IL-10在SHAM组中最低,CLP组中最高,MPL组中内毒素及IL-10比SPL组显著降低(P<0.05),但MPL组TNF-α水平比SPL组稍高,差异不显著(P>0.05)。(4)术后48hTregs含量在SHAM组中最低,CLP组中最高(P<0.05),MPL组相比SPL组和CLP组显著降低(P<0.05)。结论:基于DCS的计划性多次腹腔冲洗,能有效提高严重腹腔脓毒症大鼠模型的生存率,通过有效清除腹腔脓液、积液及感染坏死组织,减少感染局部细菌和内毒素产生及扩散,从而减轻其引起的全身炎症反应,保护脏器功能,改善免疫紊乱,为严重腹腔感染脓毒症相关机制研究和临床治疗提供一定参考。