论文部分内容阅读
本研究拟研制Her-2/neu抗独特型单克隆抗体，为下一步深入研究Her-2/neu阳性乳腺癌抗独特型抗体疫苗奠定基础。在许多恶性肿瘤中都有Her-2/neu的大量增殖或高表达并且提示着较差的预后。因此Her-2/neu作为一种肿瘤相关抗原是肿瘤免疫治疗的一个有效的靶点。Her-2/neu的抗独特型抗体可以模拟Her-2/neu的特异性表位，使其可以代替作为肿瘤相关抗原的Her-2/neu刺激机体产生相应的免疫作用。因此Her-2/neu抗独特型抗体疫苗可以作为一种Her-2/neu阳性肿瘤免疫治疗的新手段。在我们的实验中，我们用赫赛汀免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术获得Her-2/neu抗独特型单克隆抗体。共得到三株能分泌Her-2/neu抗独特性单克隆抗体的细胞株，分别命名为：1F5、2D1、2C4。亚类检测显示：1F5为IgG3、2D1为IgG2b、2C4为IgG1。mAb2未浓缩腹水效价分别是：1F5为1:1.02-2.04104、2D1为1:3.2-6.4103、2C4为1:160-320。根据腹水效价，我们采用1F5和2D1的细胞株进行后续试验。通过竞争性抑制ELISA试验，我们发现1F5和2D1可以竞争Her-2/neu同抗Her-2/neu兔多克隆抗体的结合。我们用1F5和2D1免疫兔获得含有抗Her-2/neu抗独特型抗体的血清，并且证实Ab3可以和Her-2/neu特异性的结合。这些结果可以证明1F5和2D1是可以替代Her-2/neu的β型Her-2/neu抗独特型单克隆抗体。根据血清中Ab3的滴度选择1F5诱生的Ab3做后续试验。通过MTT实验可以发现不同浓度的pAb3可以抑制Her-2/neu表达阳性肿瘤细胞系（SK-BR-3）在体外的生长，并且实验组的抑制率同对照组相比有统计学意义（P＜0.001）。综上所述，我们利用现有条件首先在国内筛选制备出了Her-2/neu抗独特型单克隆抗体，并对其中一株的肿瘤疫苗性进行了进一步的研究，为乳腺癌的免疫治疗提供可能的新的疫苗的候选。Her-2/neu抗独特型抗体的研究国内目前未见报道。