ATAD2在人胃腺癌中的表达及其对胃腺癌细胞增殖能力影响的体外实验研究

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目的:通过检测三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)在人胃腺癌组织中的表达情况,检测ATAD2对人胃腺癌细胞增殖及克隆形成能力、细胞周期及细胞凋亡的影响,初步探讨ATAD2在人胃腺癌发生及发展过程中的作用及意义。  方法:收集12对新鲜人胃腺癌及相应癌旁相对正常组织,应用实时荧光定量PCR(Realtime fluorescence quantitive PCR,qRT-PCR)及免疫蛋白质印迹法(Western blot)分别检测ATAD2在新鲜胃腺癌组织中mRNA及蛋白水平的表达;收集121例人胃腺癌及相应癌旁相对正常组织制作组织芯片,利用免疫组化法检测ATAD2的表达水平,另检测其在78例慢性浅表性胃炎、43例慢性萎缩性胃炎、16例低级别上皮内瘤变、13例高级别上皮内瘤变中的表达,应用统计学方法分析ATAD2的表达与患者临床病理特征及术后生存期的关系;构建小干扰RNA(siRNA),干扰人胃腺癌细胞系SCG-7901及MGC-803细胞中ATAD2的表达,通过MTT、平板克隆形成实验检测ATAD2对胃腺癌细胞增殖及克隆形成能力的影响,通过流式细胞仪检测ATAD2对细胞周期及细胞凋亡的影响。  结果:qRT-PCR及Western blot结果显示,ATAD2在12对新鲜胃腺癌组织mRNA及蛋白水平表达均升高(t=4.624~4.664,P<0.01)。ATAD2在非瘤变胃组织中均不表达;在胃腺癌组织中的表达明显高于相应癌旁相对正常组织(z=-12.588,P<0.01);在胃腺癌、高级别上皮内瘤变中的表达均高于低级别上皮内瘤变(z=-2.531~-2.285,P<0.05);在低级别上皮内瘤变中的表达明显高于慢性萎缩性胃炎及慢性浅表性胃炎(z=-4.935~-6.489,P<0.01);ATAD2在胃腺癌与高级别上皮内瘤变、慢性萎缩性胃炎与慢性浅表性胃炎之间的表达均不具有统计学意义(P>0.05);胃腺癌中ATAD2的表达与患者肿瘤大小、分化程度相关(χ2=5.506~8.412,P<0.05),而与年龄、性别、淋巴结转移、TNM分期、浸润深度无关(P>0.05)。应用Kaplan-Meier分析表明,ATAD2低表达的胃腺癌患者术后总体生存期(P=0.003)和无病生存期(P=0.002)较高表达的患者更长;在低分化胃腺癌患者中,ATAD2表达高的患者术后总体生存期(P=0.028)和无病生存期(P=0.011)较表达低的患者更短;Cox多因素回归分析表明,ATAD2是影响胃腺癌患者术后总体生存期和无病生存期的独立预后因素(P<0.05)。敲降ATAD2后,胃腺癌细胞系SGC-7901、MGC-803细胞的增殖能力及克隆形成率均降低(t=5.356~52.410,P<0.05);通过细胞周期检测,G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显降低(t=2.514~47.956,P<0.05);通过细胞凋亡检测,ATAD2促进胃腺癌细胞系SGC-7901、MGC-803细胞的凋亡(t=2.690~6.215,P<0.05)。  结论:ATAD2可能参与了胃腺癌的发生及发展过程,并可能成为某些胃粘膜病变性质判定的有价值的指标之一;ATAD2的表达与胃腺癌患者术后生存期相关,提示ATAD2可以作为判断胃腺癌患者预后的潜在分子标志物;ATAD2可通过促进细胞周期G1/S期的转换,并抑制细胞凋亡从而促进胃腺癌细胞系SGC-7901、MGC-803细胞的增殖及克隆形成能力。
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