环境激素五氯酚(PCP)的荧光定量PCR检测研究

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五氯酚C6HCl5O(PCP)是一种酚类化合物,可干扰动物体正常的内分泌功能,是环境内分泌干扰物质中具有代表性的物质,其化学性质比较稳定,易富集于沉积物中,不易降解,在环境中的残留量相对较高,因此当它作为土壤杀虫剂曾在世界范围内广泛应用时,也就造成了严重的环境问题。目前国内外学者对五氯酚的监测方法进行了研究,但利用环境激素五氯酚的受体,结合荧光定量PCR技术,对其进行分析和监测尚未见国内外报道。本实验就此做了初步研究。主要研究成果如下:1.将购于市场的金鱼暴露于一定浓度的五氯酚中驯养一个月后,取其受体用于实验,通过电泳发现,其的荧光强度强于未暴露的一组金鱼。这证明了外界环境激素五氯酚存在的情况下,可以刺激金鱼产生更多的相应的受体。2.实验中采用了羟基磷灰石微量法对配体受体结合后的情况进行了分析,结果表明,此方法除去了杂质蛋白,纯化效果显著,从而可减少PCR实验中的非特异性扩增。3.本研究中分别进行了常规PCR实验与SYBR Green I荧光定量PCR实验。前者作为定性分析,后者作为定量分析。实验中得了到五氯酚浓度与Ct值的关系式:y=-0.448x+9.032。分析结果可知,五氯酚浓度为10-13-10-9mol/L时,线性关系显著(R2=0.9975)。而当进一步降低五氯酚浓度时,检测结果为阴性,从而确定本实验中荧光定量PCR法对五氯酚的最低检测限为10-13mol/L;重复性实验结果表明,荧光定量PCR法的重复性好。4.实验还将荧光定量PCR方法与高效液相色谱法做了比较,当五氯酚的浓度为10-9mol/L时,高效液相色谱法已检测不出血氯酚,从而进一步证实荧光定量PCR测定五氯酚的检测限低。5.本实验最后还将荧光定量PCR方法应用到水中及白蛤中五氯酚含量的检测,确定了受测样品中五氯酚的含量,研究表明,结果是可信的。综上,本实验成功建立了五氯酚的SYBR Green I荧光定量PCR监测方法,检测限低,重现性较好且简单易行,可以将作为一种新的快速准确监测环境中痕量五氯酚的方法。
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