A型流感是一种严重威胁着人类和动物的人兽共患疾病。根据流感病毒表面的糖蛋白不同,可将其分为16种HA亚型和9种NA亚型。A型流感病毒的宿主范围广泛,包括鸟类、海豹、鲸、人类、马属动物和猪等。水禽是流感病毒的天然宿主。一般来说,A型流感病毒具有宿主特异性;然而,有时也会突破宿主障碍而感染新的宿主。　　 2004年全球首例犬流感是由马源H3N8亚型A型流感病毒引起的,并在北美的犬群中流行。感染实验证明该病毒可以感染犬并引起呼吸道症状。随后英国也有类似的报道,该病毒可能是通过宠物犬携带入境传播给本地犬类。2006年泰国也报道了H5N1亚型高致病性禽流感病毒感染犬的病例。感染实验表明:H5N1亚型高致病性禽流感病毒可以感染犬但不会导致犬只死亡;并且不会在犬与犬之间以及犬与猫之间进行传播。2007年韩国首次报道了犬感染H3N2亚型流感病毒,该病毒来源于禽源,并通过人工感染和同居感染实验可以成功地感染试验犬。　　 2006～2007年,本实验室采集广东部分地区临床呼吸道疾病患犬的鼻咽拭子,接种9～11日龄SPF鸡胚后,经37℃培养96小时,收集尿囊液进行血凝试验。对采集的血清进行血凝抑制试验进行初步的亚型确定。首次于我国广东省分离到4株犬流感病毒(canine influenza virus,CIV),初步确定为H3N2亚型的流感病毒。对4株H3N2亚型CIV全基因组进行RT-PCR扩增、克隆、测序,将测序及整理获得的各个毒株基因的序列,通过Lasergene(Version 7.10)的SeqMan基因编辑软件对测定的流感序列进行编辑,并将序列提呈NCBI BLAST SERVER(Version 2.0)进行联机检索以进一步确定各个毒株的亚型,结果显示这4个毒株均为H3N2亚型流感病毒(A/canine/Guangdong/01/2006(H3N2),A/canine/Guangdong/02/2006(H3N2),A/canine/Guangdong/01/2007(H3N2)和A/canine/Guangdong/02/2007(H3N2))。　　 利用MEGA 4.0软件对这4株H3N2亚型流感病毒的各个基因的核苷酸序列与从NCBI核酸序列数据库中下载的具有代表性的流感病毒相应基因进行比较。结果表明:这4株H3N2亚型流感病毒各个基因的核苷酸序列与GenBank中的禽源流感病毒的相应基因核苷酸序列的相似性较高、亲缘关系较近,因此这4株H3N2亚型流感病毒的各基因片段具有禽源流感病毒的特征。　　 此外,本实验还研究了H3N2亚型流感病毒对犬的感染性,利用A/canine/Guangdong/01/2007(H3N2)株犬流感病毒通过气管注射、滴鼻和同居三种人工感染方式感染8～10周龄健康沙皮犬,同时设置空白对照组。分别观察临床症状和体温变化,采集血液和收集血清进行全血球计数、血清生化、犬流感病毒抗体水平等检测;采集鼻咽拭子和肛门拭子检测排毒情况;收集试验犬不同的组织器官进行病毒分离和病理组织学检查并应用免疫组织化学法检测组织器官内CIV抗原的分布和定位。结果显示:三种感染途径均可有效使犬只感染并于感染后第1天开始体温升高,出现喷嚏、鼻分泌物、咳嗽等临床症状;试验犬的全血球计数和血清生化指标无明显变化;采集的鼻咽拭子仅有感染后第1、3、5天可以检测到病毒,而所有的肛门拭子均未检测到病毒;试验犬于感染后第7天开始产生抗体且抗体水平呈逐渐升高趋势;仅肺脏组织中分离到病毒并引起病理组织学变化,通过免疫组织化学法可以在肺脏组织中检测到CIV抗原,且该病毒抗原主要定位于淋巴细胞及上皮细胞内。　　 本实验选择A/canine/Guangdong/01/2007(H3N2)毒株,根据其NS基因序列,设计一对特异性引物NS1F1/NS1R1,经RT-PCR扩增出该毒株的NS1基因,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a,(+),并进一步酶切分析和序列测定,鉴定出NS1基因的阳性重组子。阳性质粒转化E.coli BL 21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western Blotting分析鉴定,成功的在细菌包涵体中表达出45KD的NS1融合蛋白。以5μg/mL重组蛋白作为抗原包被聚苯乙烯微量反应板,初步建立了H3N2亚型犬流感NS-ELISA检测方法。建立的ELISA检测方法与HI检测方法的符合率较高,敏感性高于HI检测方法。