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目的:构建Fas基因真核表达质粒pBK-Fas并将其转导入舌鳞癌Tca8113细胞,探讨Fas基因转染舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑瘤作用,为舌鳞癌的Fas基因治疗提供实验基础。方法:取对数生长期的淋巴细胞,采用RT-PCR反转录成cDNA扩增Fas基因全长,亚克隆到真核表达载体pBK-CMV内,构建出重组真核表达质粒pBK-Fas,酶切鉴定并测序。脂质体法将pBK-Fas转染Tca8113细胞,RT-PCR检测Fas mRNA表达及半定量分析,琼脂糖凝胶电泳检测Fas基因转染细胞凋亡,流式细胞仪检测Fas蛋白表达。通过细胞生长曲线描记、MTT法检测细胞增殖抑制率和软琼脂集落形成实验研究Fas基因转染的体外抑瘤效应。结果: 1. Fas基因总RNA在提取进程中没有发生明显的降解,说明总获得的RNA和mRNA完整。PCR扩增后的产物在约1008bp处出现明显的特异性条带,与理论预计的cDNA片段长度一致。2. Fas基因真核表达质粒pBK-Fas成功构建,重组质粒pBK-Fas经酶切和测序鉴定,表明均含有大小正确的Fas基因片段。3.真核表达质粒pBK-Fas成功转染舌鳞癌Tca8113细胞,经检测Fas基因转染能提高Fas mRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。F a s基因转染显著提高Fas蛋白表达强度,由转染前的34.01±4.76上升到转染后的55.72±7.33,统计分析差异有显著性(P<0.01),而Fas蛋白阳性率差异无显著性,说明舌鳞癌细胞并非有Fas表达就发生凋亡,只有Fas表达达到一定强度,凋亡才会大量发生。Fas转染细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径,根据琼脂糖凝胶电泳检测Fas转染细胞凋亡的结果是转染组的Tca8113细胞被降解形成明显的DNA梯状条带,高表达增强了对凋亡的敏感性。4.细胞生长曲线测定结果显示未转染的Tca8113细胞群体倍增时间为0.8天,对数生长期在3-7天之间。而转染的Tca8113细胞群体倍增时间为2天,对数生长期在4-8天之间,最大细胞数为2.6×105,明显低于非转染组细胞,说明Tca8113细胞的生长速率低于对照组未转染组Tca8113细胞。5.MTT法检测细胞增殖抑制率的结果显示pBK-Fas转染组Tca8113细胞的增殖抑制作用最明显,转染组Tca8113细胞系的OD570值为0.186±0.007,增殖抑制率为51.43%,与对照组比较,差异有显著性(P<0.01),表明Fas基因转染能增加舌鳞癌Tca8l13细胞的增殖抑制率,结果与细胞生长曲线测定(计数法)结果具有一致性。6.软琼脂集落形成实验结果显示,重组质粒pBK-Fas转染组Tca8l13细胞的集落形成率为0.5%,与未转染细胞相比,重组质粒转染的Tca8113细胞群体倍增时间延长,克隆形成能力降低。结论:Fas基因片段被成功插入真核表达载体pBK-Fas质粒的多克隆位点。Fas基因转染能有效的抑制体外培养的舌鳞癌Tca8113细胞的生长,促进了转染细胞的凋亡。