本文以脂肪酶为催化剂,以有机溶剂为反应介质,在此体系中对DL-乳酸乙酯不对称水解进行初步摸索,并对反应条件进行优化,最后研究了乳酸乙酯不对称水解的动力学。首先探讨了在有机介质中酶催化外消旋乳酸乙酯不对称水解制备L-乳酸的可行性。通过单因素实验研究了反应介质、不同来源的酶、摇床转速、水含量、乳酸乙酯浓度及温度等因素对反应的影响。结果表明,N435的活性和选择性较高,叔丁醇和异辛烷的混合溶剂(体积比为1:1)为最适的反应介质,其余最适条件为:摇床转数200 r/min、水含量(水与乳酸乙酯的质量比)为0.2、乳酸乙酯浓度0.27 g·mL-1、酶浓和反应温度分别为0.8 g·mol-1和60℃,在此条件下反应16h得产物ee值为90.02% ,产率为28.69%。其次在以上单因素实验的基础上,通过Plackett-Burman(PB)实验从以上六种反应条件中筛选出主要的影响因素,实验结果分析表明酶浓、温度和底物浓度是主要的影响因素。采用中心组合设计实验对主要影响因素进行进一步的优化,利用统计软件SAS对数据进行处理,确定最佳反应条件为:温度58℃,摇床转数200 r/min,酶浓度0.82 g·mol-1,底物浓度0.25 g·mL-1,水与乳酸乙酯的质量比为0.2, L-乳酸的ee值率达到94.38%,L-乳酸产率为30.02%。最后研究了乳酸乙酯不对称水解的动力学,结果表明反应符合米氏方程,属于双底物抑制的双乒乓机制,并考察了D-乳酸乙酯和D-乳酸在建立反应动力学模型时的影响。