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本文从以下几方面进行论述: 第一部分 目的:异氟醚是临床上广为应用的吸入麻醉药,本课题组前期研究已经证实异氟醚后处理对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤具有保护作用,本实验旨在探讨异氟醚后处理对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的保护作用是否与AMPA受体有关。 方法:7d龄新生SD大鼠100只(体重12~16g),随机分为五组,分别为假手术组(Sham组)、缺血缺氧组(HI组)、1.5%异氟醚后处理组(Iso组)、1.5%异氟醚后处理+激动剂组(Iso+AMPA组)、1.5%异氟醚后处理+抑制剂组(Iso+CNQX组),每组20只。除了Sham组只找到左侧颈总动脉不结扎,不进行低氧处理,其余各组均双重结扎左侧颈总动脉,放回母鼠身边喂哺2h,后以8%O2+92%N2的湿化混合气体以2L/min的流量低氧处理2h,制备HIBD模型。模型制备成功后,Iso组、Iso+AMPA组、Iso+CNQX组均即刻吸入1.5%异氟醚30min,以30%O2+70%N2湿化混合气体输送,流量2L/min,Sham组、HI组只吸入流量2L/min的30%O2+70%N2湿化混合气体30min。大鼠苏醒后,30min内完成侧脑室注射: Sham组、HI组、Iso组左侧脑室注射生理盐水,Iso+AMPA组左侧脑室注射AMPA,Iso+CNQX组左侧脑室注射CNQX。手术后7d,测定大鼠体质量,测定左、右大脑半球质量并计算质量比,切片HE染色计数左、右侧大脑海马CA1区正常神经元数量并计算密度比。 结果:各组大鼠体质量无统计学差异(P>0.05),与Sham组比较,各组大鼠左/右大脑半球质量比均下降(P<0.05),海马CA1区左/右侧正常神经元密度比下降(P<0.05)。与HI组比较,Iso组、Iso+CNQX组大鼠左/右大脑半球质量比以及左/右侧海马CA1区正常神经元密度比有明显升高(P<0.05),而Iso+AMPA组大鼠左/右大脑半球质量比及左右侧海马CA1区正常神经元密度比却无明显变化(P>0.05)。相比Iso组,Iso+CNQX组大鼠左/右大脑半球质量比及左/右侧海马CA1区正常神经元密度比却无明显变化(P>0.05),而Iso+AMPA组大鼠左/右大脑半球质量比及左/右侧海马CA1区正常神经元密度比明显降低(P<0.05)。 结论:异氟醚后处理对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤有保护作用,并且其保护可能与抑制AMPA受体过度活化有关。 第二部分 目的:本实验第一部分研究显示异氟醚后处理可能是通过抑制AMPA受体过度活化而对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤起到保护作用,但AMPA受体是由GluR(1-4)亚单位组成的异聚体,GluR2作为AMPA受体的关键亚基,对Ca2+的通透性调节及神经细胞损伤起到重要作用,本实验旨在探讨异氟醚后处理对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的保护作用是否是稳定AMPA受体GluR2在突触后膜表达来实现。 方法:7d龄新生SD大鼠75只,体重12~16g,随机分为三组,分别为假手术组(Sham组)、缺血缺氧组(HI组)、1.5%异氟醚后处理组(Iso组),每组25只。Sham组只找到左侧颈总动脉不结扎,不进行低氧处理。HI组和Iso组制作HIBD模型:两次结扎左侧颈总动脉,返回母鼠身边恢复2h,后置于37℃水浴环境的自制缺氧箱内,以2L/min的流量持续输入8%O2+92%N2的湿化混合气体,低氧处理2h。建立模型后,Iso组即刻以湿化30%O2+70%N2的混合气体输送1.5%异氟醚,处理30min,流量为2L/min,sham组、HI组只吸入30%O2+70%N2的湿化混合气体。术后分别于1d、7d、14d、28d各组取5只大鼠,取损伤侧海马组织,western-blot测定HI组各时间点AMPA受体GluR2蛋白的表达,选取GluR2表达下降最明显的时间点,各组取5只大鼠做western-blot及免疫荧光测定各组该时间点GluR2的表达情况。 结果:与Sham组比较,HI组和Iso组损伤侧海马组织细胞膜AMPA受体GluR2表达降低(P<0.05),荧光光密度下降;但与HI组比较,Iso组损伤侧海马组织AMPA受体GluR2表达显著升高(P<0.05),荧光光密度增强。 结论:异氟醚后处理通过抑制AMPA受体对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤起到保护作用,并且可能主要通过稳定AMPA受体GluR2在突触后膜的表达来实现。