中华鳖（Pelodiscus sinensis）又称甲鱼、团鱼等,隶属于爬行纲、龟鳖目、鳖科（Trionychidae）、鳖属（Pelodiscus）,广泛分布于东亚和东南亚的淡水河流和湖泊中。中华鳖具有明显的性别二态性,雄性个体的经济价值和营养价值显著高于雌性个体,深受养殖者和消费者的喜爱。因此,利用性别控制技术进行中华鳖的全雄育种,提高子代的雄性率已成为当前研究的热点,具有重要的研究与应用意义。本课题组已经利用雌激素成功诱导获得了由雄性性逆转为雌性的伪雌性中华鳖,为全雄育种奠定了基础。本研究对雌性、雄性和伪雌性中华鳖的性腺进行转录组比较分析,筛选出了与中华鳖性腺发育相关的候选基因。并以参与性腺发育与性别分化的Sox基因家族作为研究对象,对在雌二醇诱导的中华鳖性逆转过程中的分子表达变化进行分析。克隆获得Sox3 c DNA全长序列,并对不同组织、不同发育阶段胚胎、外源雌激素诱导和慢病毒干扰后的Sox3动态表达进行分析,探究了Sox3基因在中华鳖性别分化和性逆转过程中的作用。主要研究结果如下:（1）中华鳖性腺转录组比较分析对雌性、雄性和伪雌性中华鳖的性腺进行转录组比较分析,两两比较共鉴定出了14,430个差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）,分别有3,017和975个DEGs在雄性和雌性中特异性表达。此外,只在伪雌性中表达的DEGs有147个,在雌性和雄性中均不表达。对DEGs进行的GO和KEGG分析结果表明,与性别相关的DEGs集中于类固醇激素合成途径,如甾体激素生物合成途径（ko00140）、卵巢甾体生成途径（ko04913）和孕激素介导的卵母细胞成熟途径（ko04914）。进一步筛选出与中华鳖性别分化和性腺发育相关的候选基因主要包括:Cyp19a1、Cyp11a、Hsd3b、Hsd11b2、Hsd17b7,Wnt基因家族、R-spondin基因家族和Sox基因家族等。（2）与中华鳖性逆转相关的Sox基因的鉴定与筛选通过对性腺转录组数据进行分析,共获得17个Sox基因的转录本,其中有10个性别相关的Sox基因在雄性与雌性、雄性与伪雌性、雌性与伪雌性比较组中差异表达。通过RT-q PCR对差异表达Sox基因进行性腺中的表达分析发现,Sox1、Sox3、Sox6、Sox11和Sox17表现出雌性特异性表达,而Sox9、Sox12和Sox30表现出雄性特异性表达。Sox8仅在伪雌性中有高表达。相比于雄性性腺,在伪雌性中Sox3、Sox8、Sox11和Sox17高表达,Sox9和Sox30低表达。通过RT-q PCR对其在雌二醇（estradiol,E2）诱导性逆转过程中胚胎的表达变化进行分析。结果表明,外源性雌激素可以激活Sox3的表达,抑制Sox8和Sox9的表达。而Sox11、Sox17和Sox30则无明显变化。推测Sox11、Sox17和Sox30不参与性别分化,只具有参与性腺发育和维持性腺的功能。Sox3可能促进雄性向雌性性逆转,而Sox8和Sox9在此过程中被抑制。即Sox3在中华鳖胚胎性别分化中通过雌激素途径调控雌性性别分化,而Sox8和Sox9则抑制这一过程。（3）Sox3在中华鳖胚胎性腺发育中的表达变化本研究中发现Sox3仅在脑和性腺中高表达。Sox3在脑中没有雌雄表达差异,而在卵巢中表现出雌性特异性表达。在胚胎发育阶段（卵巢分化启动时期是第12期）,Sox3仅在第9～13期有高水平表达,其他时期以及雄性胚胎发育时期的表达水平较低。这可能说明Sox3参与中华鳖雌性性别分化的启动和卵巢发育。外源性E2能显著增强性别分化期内Sox3的m RNA信号。在E2处理后的雌雄胚胎中,Sox3的表达水平均显著升高。在E2诱导的雌性胚胎中,Sox3的m RNA表达水平达到峰值的时间（处理后12h）要明显早于雄性（处理后72h达到峰值）。这可能是Sox3主要在中华鳖雌性性别分化的启动时期前后发挥作用。Sox3慢病毒干扰实验发现,在干扰后的雌性胚胎（ZW+RNAi）中,雄性性别决定基因Sox9表达上调,而雌性通路的关键基因Ctnnb1的表达下调。证实Sox3在中华鳖早期雌性性腺分化启动时发挥重要作用。Sox3可能是中华鳖早期启动雌性性别分化的基因之一,促进性腺向卵巢分化,并且在此过程中抑制Sox9促进的雄性性别分化通路。