近年来癌症的发病率逐年升高,然而传统治疗手段对肿瘤靶向性差,这就促使人们研发新的治疗技术,如应用溶瘤病毒进行生物治疗来杀伤肿瘤细胞。重组新城疫病毒（rNDV）能够抑制肿瘤细胞生长,而对正常细胞生长无影响,预示其广泛的应用前景。已有研究表明,将细胞因子基因（如IL2）插入rNDV基因片段之间,可以提升rNDV的溶瘤效果。但是,外源基因的表达水平是否受到rNDV插入位点的调节,从而影响rNDV的溶瘤效果尚不清楚。本研究首先应用反向遗传操作技术,将外源基因EGFP和IL2分别插入rClone30毒株的NP/P、P/M、M/F和F/HN基因之间,成功构建重组病毒质粒。将重组病毒质粒分别与辅助质粒共转染BHK21细胞,成功拯救出rClone30。上述rClone30分别侵染HepG2、A549、U251和Hela细胞48 h后,分别用免疫荧光技术、qRT-pCR和流式细胞术检测EGFP和IL2的表达和转录水平。同时,绘制rClone30的生长曲线以评价其增殖特性。为了进一步评价IL2对rClone30溶瘤效果的影响,在成功建立C57/J6小鼠腋下皮下H22实体瘤模型基础上,对小鼠进行4次rClone30瘤内注射治疗,观察120天,并测定小鼠肿瘤体积和小鼠生存率。分离存活小鼠脾细胞内CD4+T和CD8+T细胞,应用流式细胞术测定其百分比。结果显示,构建的rClone30能够在鸡胚中连续传10代且稳定增值,说明外源基因片段的插入并未对病毒在肿瘤细胞内的增殖能力造成影响。rClone30的生长曲线显示EGFP和IL2的插入对rClone30的生长特性没有显著影响。rClone30-EGFP侵染肿瘤细胞48 h后,免疫荧光和流式细胞术检测发现,与其他插入位点相比较,插入NP/P位点（rClone30-EGFP-NP/P）EGFP表达量最高。qRT-pCR检测显示,rClone30-EGFP-NP/P的EGFP转录水平最高。与rClone30-EGFP-NP/P类似,插入NP/P位点（rClone30-IL2-NP/P）IL2的表达水平和转录水平也是最高。重要的是,不论是rClone30-EGFP-NP/P,还是rClone30-IL2-NP/P,在HepG2中的表达水平和转录水平,均显著高于其他细胞。体内溶瘤效果实验发现,与其他插入位点相比,rClone30-IL2-NP/P对H22肿瘤抑制率最高（98.25%）,其小鼠存活率也最高（80%）。此外,rClone30-IL2-NP/P治疗小鼠CD4+T和CD8+T数量也最高（11.1%和20%）,这些结果说明,NP/P位点是外源基因的最佳插入位点。