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本文以鲜罗汉果为研究对象,首先,利用常温超高压提取技术对罗汉果甜苷进行提取,以罗汉果甜苷V得率为评价指标,确定了最佳的提取工艺参数,并和加热回流提取方法做比较。同时,以罗汉果甜苷V得率和透光率为评价指标,对澄清剂进行了粗选及优化实验,确定了最佳的澄清剂及澄清工艺条件。最后,通过对10微米C18制备柱的工艺条件进行摸索,完成了罗汉果甜苷V的进一步纯化,得到了高纯度的罗汉果甜苷V。(1)确定常温超高压提取罗汉果甜苷的最佳提取工艺条件。通过单因素及正交实验,确定了最佳提取工艺参数:处理压力300 KPa、保压时间2.5 min、料液比1:12。在此提取条件下,重复提取3次,罗汉果甜苷V的得率为4.705 mg/g。研究结果还表明,影响罗汉果甜苷V提取的最主要因素为料液比,其次为处理压力,而保压时间对提取的影响并不显著。(2)确定了澄清效果最佳的澄清剂,以及澄清工艺条件。通过粗选实验,筛选出了四种澄清效果较好的澄清剂,并分别进行了单因素及正交优化。ZTC-Ⅱ型澄清剂的最佳澄清工艺参数:稀释提取液为提取原液浓度的0.67倍,ZTC-Ⅱ型澄清剂A,B组分的添加比例(mL:mL)为0.67:2.33,添加量为2%。在此澄清作用条件下,重复澄清3次,综合评分为98.21%。JH澄清剂的最佳澄清工艺参数:稀释提取液为提取原液浓度的1.25倍,JH澄清剂A,B组分的添加比例(mL:mL)为3.00:2.00,添加量为4%。在此澄清作用条件下,重复澄清3次,综合评分为96.65%。101果汁澄清剂的最佳澄清工艺参数:稀释提取液为提取原液浓度的1.25倍,加入澄清剂时的温度为30 ℃,添加量为1.5 g/100mL。在此澄清作用条件下,重复澄清3次,综合评分为93.15%。Ca(OH)2的最佳澄清工艺参数:添加量为1.5g/100mL,加入澄清剂时的温度为40 ℃,搅拌速度20r/min。在此澄清作用条件下,重复澄清3次,综合评分为97.58%。通过比较四种澄清剂的澄清试验结果,我们可以看出,ZTC-Ⅱ澄清剂的澄清效果最好,工艺稳定,可用于罗汉果甜苷提取液的澄清。(3)确定10微米C18柱(250×30mm)制备纯化的最佳工艺条件。以10微米C18制备柱对50%罗汉果甜苷V提取物进行进一步的纯化,通过实验确定了最佳工艺参数:流速:15mL/min;进样量1.0mL;洗脱条件为:23%乙腈-77%水(V:V)。在此制备条件下进行纯化,经HPLC检测,罗汉果纯度达到96.1%,回收率95.0%,获得了高纯的产品。