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第一部分免疫抑制治疗PI3Kδ过度活化综合征的疗效分析目的:分析6例1型PI3Kδ过度活化综合征(activated phosphoinositide 3-kinaseδsyndrome type 1,APDS1)患儿和1例2型APDS(APDS2)患儿使用雷帕霉素或醋酸泼尼松治疗后,临床和免疫学表现的变化。为APDS的发病和治疗机制研究提供依据。方法:研究对象为2015年9月至2019年9月在我院就诊并予以雷帕霉素或醋酸泼尼松治疗的APDS患儿。收集并汇总患儿在我院住院和随访期间的临床资料及实验室检查结果,免疫印迹法或流式细胞术检测磷酸化AKT(Ser473)表达水平和磷酸化S6的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI),流式细胞术检测淋巴细胞亚型分布变化。结果:6例APDS1患儿均为PIK3CD c.3061G>A杂合热点突变,其中2例使用雷帕霉素治疗,4例使用醋酸泼尼松治疗;1例APDS2患儿为PIK3R1 c.1425+1G>A杂合热点突变,使用醋酸泼尼松治疗。6例APDS1患儿在使用雷帕霉素或醋酸泼尼松治疗后,肿大的肝脾和浅表淋巴组织均有不同程度缩小,1例患儿的贫血症状有明显改善;使用雷帕霉素治疗的APDS1患儿,磷酸化AKT(Ser473)蛋白表达水平和磷酸化S6的MFI值相比正常对照均降低;使用醋酸泼尼松治疗的APDS1患儿中,磷酸化S6的MFI值比正常对照降低,磷磷酸化AKT(Ser473)蛋白表达水平比正常对照升高。1例APDS2患儿在使用醋酸泼尼松治疗后,肿大的肝脾和浅表淋巴结明显缩小,贫血情况好转,免疫球蛋白M降低;与正常对照相比,磷酸化AKT(Ser473)的MFI值升高,磷酸化S6的MFI值降低。结论:APDS的治疗包括抗生素预防治疗,免疫球蛋白替代治疗,免疫抑制治疗和造血干细胞移植。本研究发现,雷帕霉素和醋酸泼尼松治疗均对APDS患儿的淋巴组织增生有抑制作用,醋酸泼尼松治疗对自身免疫性溶血性贫血明显改善,但对于缓解肺部感染频率,还需使用免疫球蛋白替代治疗。APDS患儿中PI3K持续激活,而雷帕霉素能够降低AKT和mTOR通路活性,醋酸泼尼松能抑制mTOR信号转导,p110δ靶向抑制剂或许能为APDS患儿的治疗带来新希望。第二部分急性感染中PIK3CD GOF对T细胞免疫应答的影响目的:分析PIK3CD获功能突变(gain of function,GOF)小鼠在淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic choroid plexus meningitis virus,LCMV)急性感染后T细胞的免疫应答,了解PI3K过度活化对T细胞介导的免疫应答的影响,为APDS致病机制研究提供实验基础。方法:研究对象为PIK3CD GOF小鼠,以同窝同性别同年龄野生型(wild type,WT)小鼠为对照。在LCMV Armstrong急性感染后免疫应答的效应期、收缩期和记忆形成期,对小鼠脾脏内抗原特异性CD4~+T和CD8~+T细胞的数量和功能进行检测。流式细胞术检测抗原特异性T细胞及其分泌细胞因子的数量和比例。结果:在感染LCMV Armstrong后,与WT小鼠相比,PIK3CD GOF小鼠脾脏中抗原特异性CD4~+T细胞数量在第8天和第15天升高,第30天和第45天降低;抗原特异性CD4~+T细胞分泌的细胞因子γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ),α-肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)和白细胞介素2(interleukin 2,IL-2)的数量在第8天和第15天升高,第45天降低;抗原特异性CD8~+T细胞数量在第8天升高,第30天和第45天降低;抗原特异性CD8~+T细胞分泌的IFN-γ和TNF-α的数量在第8天和第15天升高,第30天和第45天降低,IL-2的数量在第8天升高,第30天和第45天降低。在感染后第15天,CD8~+效应T细胞中以短寿命效应T细胞(Short-lived effector cells,SLECs)为主,且PIK3CD GOF小鼠中SLECs的比例高于WT小鼠。结论:PIK3CD GOF小鼠在感染LCMV Armstrong后,与WT小鼠相比,其抗原特异性CD4~+和CD8~+效应T细胞数量增多,细胞因子表达水平升高;而抗原特异性CD4~+和CD8~+记忆T细胞数量降低,细胞因子表达水平减少。本研究初步提出PIK3CD GOF小鼠免疫记忆形成障碍,PIK3CD GOF小鼠效应T细胞转化为记忆T细胞过程中出现偏移,记忆形成障碍的内、外在影响因素以及可能涉及的调控控制尚需进一步研究,以期为APDS病人反复感染是否与记忆T细胞形成障碍有关提供实验依据。