欧美杨等再生体系的建立及其抗逆境基因转化的研究

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杨树是重要的工业用材树种。由于其基因组小,有性和无性繁殖容易,在传统和分子操作上要比大多数树种简单,所以它是林木基因工程育种的理想模式树种。本研究以我国现有的杨树优良品种(品系)欧美杨等为受体,采用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法对其进行抗逆基因(透明颤菌血红蛋白基因Vgb,大麦胚后期丰富蛋白基因HVA1和果聚糖合成酶基因SacB遗传转化,以期培育出抗逆境的基因工程杨树新品系。主要实验结果如下: 1.以5个杨树优良新品种为实验材料,分别对其建立了较理想的植株再生体系。其中,1~#欧洲黑杨(Populus nigra‘96/57’)杨树叶片诱导不定芽分化培养基:MS+BA(1.0mg/L)+NAA(0.05 mg/L),2~#欧洲黑杨(P.nigra)杨树叶片诱导不定芽分化培养基MS+BA(1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L),5~#欧美杨108(P.×euramericana ‘Guariento’)杨树叶片诱导不定芽分化培养基MS+BA(1.0 mg/L)+NAA(0.05 mg/L),16~#陕林4号(P.deltoids cl. ‘Lux’×P.cathayana)杨树叶片诱导不定芽分化培养基MS+BA(1.5 mg/L)+NAA(0.12mg/L),17~#山青杨(P.canadensis cv. ‘Shanhaiguanensis’×P.cathayana)杨树叶片诱导不定芽分化培养基MS+BA(0.5 mg/L)+NAA(0.05 mg/L),1~#杨树生根培养基:1/2MS+NAA(0.02mg/L)+IBA(0.02 mg/L)。 2.通过卡那霉素抗性筛选试验,确定了5个杨树品种卡那霉素的选择压。其中,2~#杨叶片分化不定芽卡那霉素选择压为50mg/L,其余4种杨树卡那霉素选择压均为40mg/L;16~#杨生根卡那霉素选择压为20mg/L。 3.经PCR分子检测,获得呈阳性反应的转透明颤菌血红蛋白基因(Vgb)植株3个,并正在对其基因表达进行RT-PCR分析。 4.获得一批转大麦胚后期丰富蛋白基因(HVA1)和果聚糖合成酶基因(SacB)抗卡那霉素植株,正在进行PCR分子检测。
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