我国自1999年暴发第五次口蹄疫病流行以来,至今仍未能有效地控制口蹄疫疫情,各省区散发和区域性流行现象不断出现,疫情形势异常严峻。我国现行口蹄疫灭活疫苗,由于毒株型别单一,生产工艺相对简单落后,导致疫苗免疫效力低,副反应大,对口蹄疫病的预防性较差,对现行口蹄疫灭活疫苗进行生产工艺改进,进一步提高抗原纯度,研制口蹄疫克隆纯化灭活疫苗已变得十分必要和迫切,特对其进行了以下研究:1.应用BHK₂₁细胞通过蚀斑试验克隆和再次克隆牛Asia I型口蹄疫病毒毒株AKT03并对克隆前和第一次、第二次克隆的口蹄疫病毒毒株的细胞半数感染量(TCID₅₀)、乳鼠半数致死量（LD（50））进行比较测定。结果表明,通过蚀斑试验成功的克隆了牛Asia I型口蹄疫AKT03毒株。口蹄疫Asia I _AKT03毒株克隆后的蚀斑形成单位（3.0x10⁷pfu/mL）比克隆前的蚀斑形成单位（7.2x10⁶pfu/mL）提高了4倍。克隆后口蹄疫Asia I _AKT03毒株的TCID₅₀（5.5～6.5）和LD₅₀（7.78～8.43）分别比克隆前TCID₅₀（4.37～5.75）和LD₅₀（6.88～7.43）明显提高,第一次克隆的毒株和第二次克隆的毒株的TCID₅₀和LD₅₀效价明显提高。这给制备口蹄疫疫苗提供了优质的抗原。2.应用牛口蹄疫Asia I _AKT03克隆毒株研制牛Asia I型口蹄疫油乳剂灭活疫苗并对其物理性状、无菌检验、安全检验、免疫效力检测等进行了系统的研究。应用克隆毒株研制的Asia I型口蹄疫油乳剂灭活疫苗为乳白色,稳定、稀薄、无菌、安全,免疫效力检验结果表明克隆口蹄疫Asia I _AKT03毒株疫苗的半数保护量(PD₅₀)比普通疫苗提高2.4倍。因此,克隆毒株疫苗的免疫效力比普通疫苗明显提高。