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目的:本实验主要探索IDO1在肺癌组织中的表达水平,并分析肿瘤微环境中IDO1与肿瘤血管形成之间的关系,为肿瘤的治疗提供新思路。方法:1、由南昌大学第二附属医院提供2013-2014期间手术切除肺癌石蜡切片41例,所有病例均得到手术后确切的病理诊断。免疫组织化学法检测IDO1、CD31、CD34、FactorⅧ的表达水平,统计IDO1与部分临床病理特征的关系及分析IDO1表达水平的高低与MVD的关系。2、利用转染技术建立过表达IDO1的人肺腺癌上皮A549细胞系,并用Western-blot方法检测其转染效率。MTT细胞计数法计量过表达IDO1 A549细胞的增殖情况,细胞侵袭实验检测过表达IDO1 A549细胞侵袭能力的变化。3、利用Transwell小室建立过表达IDO1 A549细胞与HUVEC细胞共培养模型,MTT细胞计数法检测共培养后HUVEC细胞的增殖情况,基质胶成管实验观察HUVEC细胞形成管样结构数量的变化,酶联免疫吸附法及实时荧光定量PCR分别从细胞因子水平及m RNA水平检测HUVEC细胞分泌VEGF量的变化。4、数据处理:统计学分析:采用SPSS 19.0统计软件进行分析。独立实验的数据采用Mean±SD表示,多因素分析采用卡方检验,实验组与对照组的组间差异比较采用t检验分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1、免疫组化结果显示肺癌组织中IDO1蛋白表达率为60.9%,低表达或者不表达率为39.1%。肺癌组织中IDO1表达水平与CD34、FactorⅧ标记的MVD呈正相关关系(r=0.333,r=0.342),与CD31标记的MVD不相关。2、Western-blot结果显示:A549细胞经转染后过表达IDO1的转染效率为41.6%。3、MTT细胞计数法检测过表达IDO1 A549细胞的增殖实验发现,过表达IDO1 A549细胞较空白对照组、阴性对照组增殖速度加快。4、侵袭实验结果显示:过表达IDO1 A549细胞较空白对照组、阴性对照组增侵袭能力增强。5、利用Transwell小室建立过表达IDO1 A549细胞与HUVEC细胞共培养模型,MTT细胞计数法检测共培养后HUVEC细胞增殖速度加快。6、基质胶成管实验显示:共培养后HUVEC细胞形成管样结构能力明显增加,6h形成管样结构,12h管样结构最为明显且数量最多,24h后管样结构逐渐消失。7、酶联免疫吸附法及实时荧光定量PCR分别从细胞因子水平及m RNA水平检测共培养后HUVEC细胞分泌VEGF的含量,结果显示过表达IDO1A549细胞与HUVEC细胞共培养组分泌的VEGF含量明显高于其他组,并随时间的变化VEGF的含量逐渐增加。结论:1、本实验免疫组化结果显示肺癌组织中IDO1表达的水平与CD34、FactorⅧ标记的MVD呈正相关关系,与CD31标记的MVD无关。2、过表达IDO1的A549细胞部分生物学特性发生变化,其增殖与侵袭能力明显增加。3、利用Transwell小室建立过表达IDO1A549细胞与HUVEC细胞共培养模型,显示共培养后的HUVEC细胞增殖能力及形成管样结构能力明显增强且m RNA水平、细胞因子水平上分泌VEGF的量明显增多。