番茄抗褪绿病毒病基因TC11.1的初步定位及抗性种质创制

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番茄是世界上栽培广泛的蔬菜作物之一。番茄褪绿病毒病(Tomato chlorosis virus,ToCV)是近年来流行爆发的一种番茄病毒病,给番茄产业造成巨大的经济损失。目前关于番茄褪绿病毒病的相关研究较少,特别是抗病基因的遗传定位与分子标记的开发、抗病品种的培育等方面。因此鉴定和克隆抗番茄褪绿病毒病的基因对于加速我国抗番茄褪绿病毒育种进程具有重要意义。本研究对番茄褪绿病毒进行了病毒粒子观察和RT-PCR鉴定,利用11份携带不同抗番茄黄化曲叶病基因(Ty-1、Ty-2、Ty-3)的栽培番茄品种在田间粉虱自然接种的条件下鉴定对番茄褪绿病毒的耐性,对病原番茄褪绿病毒的CP(Coat protein)基因、HSP70(Heat-shock protein 70 family)基因和TYLCV的DNA-A进行测序,并与NCBI中已登录的ToCV和TYLCV序列进行同源性比对和系统发育树的构建,并对抗番茄褪绿病毒病基因TC11.1进行了初步定位,主要结果如下:1.利用透射电子显微镜进行鉴定的结果表明感病叶片细胞内细胞器结构不明显,叶绿体和线粒体解体,在番茄筛管细胞中存在大量的病毒粒子聚集。利用RT-PCR鉴定,结果得到ToCV的特异谱带。2.ToCV的HSP70基因与陕西杨凌地区(MF346384)分离物的同源性最高,高达99.9%,亲缘关系也最近,与陕西杨陵、陕西晋中的分离物分布在同一分支上。ToCV的CP基因与多数地区的分离物具有99.7%的同源性,与国内分离物都在系统发育树上的同一支,与吉林、韩国的分离物亲缘关系较近。TYLCV系统进化树表明杨陵地区的分离物和美国、墨西哥的分离物亲缘关系最近,与伊朗的亲缘关系最远。明确了携带不同抗番茄黄化曲叶病基因(Ty-1、Ty-2、Ty-3)的栽培番茄品种对ToCV的耐性不同,与不携带抗性基因的材料相比,同时携带Ty-1、Ty-2、Ty-3基因的番茄品种对番茄褪绿病毒病耐性较好,而单独携带Ty-1、Ty-3基因或Ty-2基因的番茄品种耐性稍差。3.以142-1009×LA1028的F2代和F3代为主要研究材料,通过遗传与表型分析将抗病基因TC11.1定位于分子标记HP2697-HP2713之间,约730 kb范围内。在基因TC11.1定位区间内检测到72个候选基因,对这些基因进行分析比较,选出8个候选基因,分别是:Solyc11g010700、Solyc11g010730、Solyc11g010860、Solyc11g010940、Solyc11g011020、Solyc11g011080、Solyc11g011090、Solyc11g011180。在试验中创制了3份新的可用于抗病基因定位的材料。由本研究结果可得,同时携带抗番茄黄化曲叶病基因(Ty-1、Ty-2、Ty-3)的栽培番茄品种对ToCV的耐性较好,以142-1009×LA1028的F2代和F3代为研究材料,将番茄抗番茄褪绿病毒病基因TC11.1定位到730 kb范围内,为番茄抗病基因的定位与克隆奠定了基础。
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