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目的:探讨两种糖基转移酶(ppGalNAcT2及β3GnT8)对胶质瘤细胞U251侵袭转移的影响。方法:(1)将ppGalNAcT2及β3GnT8的真核表达正义载体及空载体、RNA干扰载体及其对照载体通过脂质体转染入胶质瘤细胞U251,并通过G418筛选出稳定细胞株。(2)荧光显微镜观察转入荧光载体的细胞株,RT-PCR检测ppGalNAcT2的表达;流式细胞术及MTT检测ppGalNAcT2对细胞周期及增殖的影响;划痕修复实验检测各组细胞的迁移能力差异;采用RT-PCR方法检测各组细胞MMP-2、TIMP-2 mRNA水平表达变化。(3)通过激光共聚焦显微镜观察检测GFP蛋白和β3GnT8的蛋白表达;RT-PCR及western blotting方法检测细胞β3GnT8 mRNA及蛋白水平表达变化;集落形成实验检测β3GnT8对单细胞形成集落能力的影响;划痕修复实验及Boyden小室检测细胞迁移及侵袭能力差异;采用RT-PCR及western blotting方法检测各组细胞MMP-2、TIMP-2 mRNA及蛋白水平表达变化。结果:(1)通过荧光显微镜观察、RT-PCR、western blotting及免疫荧光检测,载体成功转入细胞,得到稳定转染细胞株;(2)流式细胞术及MTT实验检测发现ppGalNAc-T2与细胞的周期时相及增殖能力间不存在显著相关性;划痕结果显示,ppGalNAc-T2上调组细胞迁移能力随ppGalNAc-T2的上调而减弱,干扰组划痕修复较快,其他对照组相近;RT-PCR检测发现随着ppGalNAc-T2的增高,MMP-2降低,而TIMP-2升高;(3)集落形成实验显示:与对照组相比,β3GnT8上调组单个细胞集落形成能力强,干扰组弱;划痕结果显示,β3GnT8上调组细胞迁移能力增强,而干扰组细胞划痕修复较慢。与划痕结果相对应的,通过Boyden小室实验发现,与对照组相比,β3GnT8上调组细胞的穿膜能力增强,细胞侵袭能力较强,而下调组穿膜率较对照组都低,侵袭能力弱;RT-PCR及western blotting检测发现随着β3GnT8表达的增高,MMP-2在mRNA水平及蛋白水平也相应升高,而TIMP-2表达水平未有显著改变。结论:(1)成功构建ppGalNAc-T2及β3GnT8上调及下调细胞株。(2)通过流式细胞术及MTT实验检测发现,ppGalNAc-T2与细胞周期及增殖能力间无显著相关性;划痕实验显示ppGalNAc-T2抑制细胞的划痕修复;进一步通过RT-PCR检测发现,ppGalNAc-T2与MMP-2呈负相关,与TIMP-2呈正相关。(3)细胞集落形成实验显示β3GnT8能促进集落形成;划痕修复及Boyden侵袭小室实验发现,β3GnT8促进细胞的划痕修复,同时促进细胞侵袭;进一步通过RT-PCR及western blotting检测显示,β3GnT8与MMP-2呈正相关,而与TIMP-2间无统计学意义。综上所述,我们推测这两种糖基转移酶ppGalNAc-T2及β3GnT8可能与胶质细胞的侵袭转移密切相关。