黄曲霉毒素是一类由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的刺激代谢产物,广泛存在于各种农作物中,具有强毒性、强致癌性、致畸性和肝毒素作用。黄曲霉毒素的理化性质非常稳定,朴永德食品加工过程很难被破坏,给人类和动物带来严重威胁,并且造成了巨大的经济损失。生物法降解黄曲霉毒素毒素由于其反应条件温和、无污染、不会造成二次污染及产品营养价值流失等优点收到人们的广泛关注。黑水虻能够耐受高浓度的黄曲霉毒素,并且将污染的饲料生物降解和利用,转化成昆虫蛋白等资源,被广泛应用。本研究用受污染的花生饼饲养黑水虻幼虫,建立了黑水虻产品中黄曲霉毒素B1的超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱测定方法,对黑水虻幼虫粉中AFB1的提取、超高效液相色谱串联质谱检测条件进行了优化。使用甲醇-水溶液(8:2,体积比),添加7%氯化钠对黑水虻幼虫粉中AFB1进行提取,免疫亲和柱净化,甲醇-乙酸铵(10 mmol/L)水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源(ESI)正离子模式检测,7.0 min出峰。结果表明:AFB1在1μg/kg-20μg/kg浓度范围内线性关系良好,相关系数>0.999,幼虫粉回收率为83.06%-1 18.36%,相对标准偏差(RSD)为6%-10%;虫粪回收率为76.6%-114.1%,相对标准偏差(RSD)为0-3%;检出限(LOD,S/N≥3)为0.01 μg/kg,定量限(LOQ,S/N≥10)为0.05μg/kg。该方法操作简单、结果准确,可以用于黑水虻幼虫粉和虫粪产品中AFB1的检测。以黑水虻幼虫肠道为材料筛选高效降解黄曲霉毒素B1的菌株。本实验以香豆素为唯一碳源和能源,经过富集和筛选,得到一株高效降解AFB1的菌株,根据该菌株16S rRNA序列分析、形态学、生理生化鉴定后,确定该菌株为微嗜酸寡养单胞菌,命名为微嗜酸寡养单胞菌A-2菌。在37℃条件下培养72h的A-2菌的不同成分对AFB1进行降解实验研究,结果发现A-2菌上清液对AFB1降解率为95%,PBS菌悬液对AFB1降解率为17.1%,细胞破碎无对AFB1降解率为7.1%。以A-2菌发酵上清为研究对象,A-2菌发酵液上清分别用0.22 μm滤膜过滤、沸水浴20 min、高压灭菌、浓缩20倍四种处理方式,0.22μm滤膜过滤稍微降解上清液对AFB1的降解率,处理后降解率为84.95%,因此A-2菌降解AFB1可能是胞外分泌物降解的。其余三种处理方式后AFB1降解效率都有提升,有显著性差异。针对A-2菌发酵上清液研究了时间、pH以及不同浓度AFB1条件下的降解能力,表明A-2菌上清液在24h后降解效率在90%以上,最佳反应pH=8.0,可以耐受较高浓度的AFB1,同时降解效率在90%以上。对A-2菌发酵液上清降解AFB1的活性物质进行分离纯化,结果发现活性物质的极性较大,并且降解活性主要存在于流出液中,结合超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱检测发现活性物质的出峰时间为2.0 min左右,结合一级和二级质谱图发现,活性物质的分子量为174,带一个正电荷,推测其结构可能是1-甲基色胺或5-甲基色胺。