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目的： 探讨AngⅡ对RAW264.7细胞程序性坏死的影响及其可能机制。 方法： 1. RAW264.7细胞的复苏、培养、传代、冻存。 2. 实验一：将RAW264.7细胞分为4组，分别为：（1）对照组：无干预；（2） 100nmol/L组：用100nmol/L AngⅡ干预；（3）1000nmol/L组：用1000nmol/L AngⅡ干预；（4）10000nmol/L组：用10000nmol/L AngⅡ干预。24h后通过MTT测各组细胞的存活率， qRT-PCR 检测各组细胞中程序性坏死相关的 RIP1mRNA、RIP3mRNA的表达，Western Blot检测各组中程序性坏死相关的RIP1蛋白和RIP3蛋白的表达，研究AngⅡ是否能引起RAW264.7细胞的程序性坏死以及是否呈浓度依赖性。 3. 实验二：将RAW264.7细胞分为4组，分别为：（1）对照组：无干预；（2） AngⅡ组：用 1000nmol/L AngⅡ干预；（ 3 ） AngⅡ+LY294002 组：用 10umol/L LY294002（PI3K/Akt的抑制剂）预干预1h，再用1000nmol/L AngⅡ干预；（4） LY294002组：用LY294002（10umol/L）干预。24h后分别通过qRT-PCR检测各组细胞中程序性坏死相关的RIP1mRNA、RIP3mRNA的表达，Western Blot检测各组中程序性坏死相关的RIP1蛋白和RIP3蛋白的表达，研究LY294002是否能减轻AngⅡ引起的RAW264.7细胞的程序性坏死，即AngⅡ引起的RAW264.7细胞的程序性坏死是否与PI3K/Akt通路有关。 结果： 1. 实验一：研究AngⅡ是否引起RAW264.7细胞的程序性坏死。 1.1 MTT测RAW264.7细胞的存活率：对照组、100nmol/L组、1000nmol/L组、10000nmol/L组RAW264.7细胞存活率分别为：1.00±0.00、0.82±0.04、0.62±0.04、0.50±0.03。与对照组相比，100nmol/L组、1000nmol/L组、10000nmol/L组RAW264.7细胞存活率均低于对照组（ P＜0.01 ）。与100nmol/L组相比， 1000nmol/L组、10000nmol/L 组 RAW264.7 细胞存活率均低于 100nmol/L 组（ P＜0.01 ）。与1000nmol/L相比，10000nmol/L组RAW264.7细胞存活率低于1000nmol/L组（P＜0.01）。 1.2 qRT-PCR检测RIP1mRNA、RIP3mRNA的相对表达水平：对照组、100nmol/L组、1000nmol/L组、10000nmol/L组的RIP1mRNA相对表达水平为：1.00±0.00、3.77±0.23、6.44±0.24、5.45±0.22；RIP3mRNA相对表达水平为：1.00±0.00、5.01±0.29、7.38±0.40、6.11±0.15。与对照组相比，100nmol/L组、1000nmol/L组、10000nmol/L组中RIP1mRNA、RIP3mRNA的表达均明显高于对照组（P＜0.01）。与1000nmol/L组相比，100nmol/L组、10000nmol/L组中RIP1mRNA、RIP3mRNA的表达均低于1000nmol/L组（P＜0.01）。 1.3 Western Blot检测RIP1蛋白、RIP3蛋白的相对表达水平：对照组、100nmol/L组、1000nmol/L组、10000nmol/L组的RIP1蛋白相对表达水平分别为：0.14±0.02、0.45±0.03、0.80±0.03、0.65±0.02；RIP3蛋白相对表达水平分别为：0.12±0.01、0.59±0.03、0.87±0.06、0.68±0.02。与对照组相比，100nmol/L组、1000nmol/L组、10000nmol/L组中RIP1蛋白、RIP3蛋白的表达均明显高于对照组（P＜0.01）。与1000nmol/L 组相比，100nmol/L组、10000nmol/L组中RIP1蛋白、RIP3蛋白的表达低于1000nmol/L组（P＜0.01）。 2. 实验二：研究LY294002是否能减轻AngⅡ引起的RAW264.7细胞的程序性坏死，即AngⅡ引起的RAW264.7细胞的程序性坏死是否与PI3K/Akt通路有关。 2.1 qRT-PCR检测RIP1mRNA、RIP3mRNA的相对表达水平：对照组、AngⅡ组、AngⅡ+LY294002组、LY294002组中RIP1mRNA相对表达水平分别为：1.00 ±0.00、6.36±0.18、2.76±0.15、1.21±0.13；RIP3mRNA相对表达水平分别为：1.00 ±0.00、7.11±0.28、3.66±0.12、1.20±0.17。与对照组相比，AngⅡ组中RIP1mRNA、RIP3mRNA的表达均明显高于对照组（P＜0.01）。与AngⅡ组相比，AngⅡ+LY294002组中 RIP1mRNA、RIP3mRNA 的表达明显低于 AngⅡ组（ P＜0.01 ）。与AngⅡ+LY294002组相比， LY294002组中RIP1mRNA、RIP3mRNA的表达低于AngⅡ+LY294002组（P＜0.01）。与对照组相比，LY294002组中RIP1mRNA的表达差别无统计学意义（P=0.06），RIP3mRNA的表达差别无统计学意义（P=0.18）。 2.2 Western Blot检测RIP1蛋白、RIP3蛋白的相对表达水平：对照组、AngⅡ组、AngⅡ+LY294002组、LY294002组中RIP1蛋白相对表达水平分别为：0.12± 0.01、0.79±0.02、0.41±0.03、0.14±0.02；RIP3蛋白相对表达水平分别为：0.13 ±0.02、0.84±0.03、0.45±0.02、0.15±0.01。与对照组相比，AngⅡ组中RIP1蛋白、RIP3蛋白的表达明显高于对照组（P＜0.01）。与AngⅡ组相比，AngⅡ+LY294002组中RIP1蛋白、RIP3蛋白的表达明显低于AngⅡ组（P＜0.01）。与AngⅡ+LY294002组相比，LY294002组中RIP1蛋白、RIP3蛋白的表达低于AngⅡ+LY294002组（P＜0.01 ）。与对照组相比， LY294002组中RIP1蛋白的表达差别无统计学意义（P=0.14），RIP3蛋白的表达差别无统计学意义（P=0.24）。 结论： 1. AngⅡ呈浓度依赖性上调RAW264.7细胞RIP1、RIP3的表达。 2. LY294002可减轻AngⅡ引起的RAW264.7细胞RIP1、RIP3的表达，即AngⅡ引起的RAW264.7细胞的程序性坏死与PI3K/Akt通路有关。