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目的:CD44变异体包括CD44v1、v2、v3、v4、v5、v6、v7、v8、v9、v10等,CD44变异体在肿瘤细胞的表达具有组织特异性。目前人们认为骨肿瘤表达与CD44各变异体的表达紧密相关,并认为CD44变异体的表达与骨肉瘤恶性程度、侵袭、转移等有关。有国内外文献研究观察了骨肉瘤中CD44v5、CD44v6的表达,而CD44v2与骨肉瘤的关系并不十分清楚。本实验旨在通过q PCR技术及细胞培养检测3种不同的骨肉瘤细胞(MG-63、U-2OS、Saos-2)中变异体CD44v2、CD44v5及CD44v6的表达情况,以及通过生长曲线、细胞周期和划痕实验判断3种不同的骨肉瘤细胞增殖、迁移能力的差异。应用统计学方法进行相关分析,探究这些变异体在不同骨肉瘤细胞表达分布,与细胞生长、增殖以及迁移能力的关系。方法:1.应用MTT法,在1-7天分别检测U-2OS、MG-63、Saos-2骨肉瘤细胞活力,并依次绘制生长曲线;2.应用流式细胞术分别测定U-2OS、MG-63、Saos-2细胞周期的变化;3.利用划痕实验观察U-2OS、MG-63、Saos-2细胞迁移能力;4.分别提取U-2OS、MG-63、Saos-2细胞RNA,逆转录为c DNA,设计q PCR引物,应用q PCR与荧光定量检测3种骨肉瘤细胞CD44v2、CD44v5、CD44v6m RNA的表达;5.应用IDEAS软件计算出各基因在各标本中的CT值,以U-2OS作为对照标准,应用2-△△CT方法计算出各个基因在各标本中表达的相对定量,用均数±标准差(x±s)来表示各个基因在各组标本中表达的相对定量值,进行相关性分析。结果:1.依据生长曲线结果显示骨肉瘤细胞MG-63增殖能力,生长速率高于U-2OS及Saos-2,骨肉瘤细胞U-2OS增殖能力,生长速率高于Saos-2。其中骨肉瘤细胞MG-63与Saos-2相比P<0.05有统计学意义。2.细胞周期结果显示:MG-63细胞在G0/G1期数值63.4%,S期18.5%,G2/M期18.1%。U-2OS细胞在GO/G1期数值43.5%,S期30.3%,G2/M期22.3%。Saos-2细胞在GO/G1期数值28.1%,S期35.3%,G2/M期36.5%。由以上结果可知,MG-63细胞中G0/G1期的细胞比例略大于U-2OS细胞和Saos-2细胞。3.根据划痕试验结果显示细胞迁移速度由快到慢为MG-63>U-2OS>Saos-2。4.q PCR相对定量结果显示CD44v2在骨肉瘤细胞MG-63表达最高,约分别是U-2OS及Saos-2细胞的94倍与70倍;CD44v5在骨肉瘤细胞MG-63中表达分别高于U-2OS及Saos-2细胞7.4倍与11.1倍;CD44v6在骨肉瘤细胞MG-63中的表达分别高于U-2OS及Saos-2细胞10倍与2.1倍。同时发现CD44v2在骨肉瘤细胞U-2OS与Saos-2中的表达没有明显差异;CD44v5和CD44v6在骨肉瘤细胞U-2OS中的表达高于Saos-2。由此推测骨肉瘤细胞的细胞活力和迁移能力可能与CD44v2的表达程度成正比。结论:1.三种骨肉瘤细胞的增殖、迁移能力不同:MG-63增殖速度最快,U-2OS次之,Saos-2最慢;MG-63迁移能力最快,U-2OS次之,Saos-2最慢。2.CD44v2、CD44v5、CD44v6在不同骨肉瘤细胞的表达有差异:其中CD44v2在MG-63表达最高,U-2OS次之,Saos-2最低。CD44v6在骨肉瘤MG-63细胞MG-63中表达高于U-2OS及Saos-2。CD44v5和CD44v6在骨肉瘤细胞U-2OS表达高于Saos-2。由此推测骨肉瘤细胞的细胞活力和迁移能力可能与CD44v2的表达程度成正比。3.骨肉瘤细胞的增殖、迁移能力不同可能与CD44v2、CD44v5、CD44v6基因的表达有关,但这些变异体之间的相关性需要进一步实验验证。