第一部分:虎杖苷对非酒精性脂肪肝药效研究　　 1.根据肝脏病理状态,可见弥漫性肝细胞大泡样脂肪变,无明显炎症、坏死及纤维化,NAFLD大鼠早期单纯性脂肪肝阶段模型复制成功。　　 2.与空白模型组相比,虎杖苷高剂量组体重明显减低(P<0.01),增长速度较慢,肝脏体减小,肝湿重减轻,肝指数明显降低(P<0.01)。肝脏病理显示,虎杖苷高、中剂量组大鼠肝细胞脂肪沉积明显减少(P<0.01),肝细胞形态、排列均明显好转。　　 3.与空白模型组相比,虎杖苷高、中剂量组大鼠血清ALT明显降低(P<0.01,P<0.05),虎杖苷高剂量组明显优于非诺贝特组(P<0.05)；虎杖苷高、中剂量组大鼠血清TG降低(P<0.01,P<0.05); 虎杖苷高剂量组大鼠血清TC、LDL-C降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C升高(P<0.01)。虎杖苷各剂量组均能降低FFA(P<0.01)。　　 第二部分:虎杖苷治疗NAFLD部分机制研究　　 1.与正常对照组比较,空白模型组大鼠总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)明显减低(P<0.01),与空白模型组比较,虎杖苷高、中剂量组均能增高肝组织T-AOC、SOD、GST,同时降低肝组织MDA(P<0.01),其中虎杖苷高剂量组提高肝脏抗氧化能力效果均优于非诺贝特组(P<0.01)。　　 2.与正常对照组比较,空白模型组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FIN)明显增高(P<0.01),IRI增高,ISI明显降低(P<0.01,P<0.05)。与空白模型组比较,虎杖苷高、中剂量组及非诺贝特组能降低FBG、FIN(P<0.01,P<0.05),减低胰岛素抵抗指数(IRI),增高胰岛素敏感指数(ISI)(P<0.01,P<0.05),其中虎杖苷高剂量效果均明显优于优于非诺贝特组(P<0.01,P<0.05)。虎杖苷低剂量各指标与空白模型组无差异(P>0.05)。虎杖苷高、中剂量组在降低IRI,增加ISI效果优于虎杖苷低剂量组(P<0.01)。　　 3.与正常对照组比较,空白模型组大鼠血清TNF-α明显高于(P<0.01),与空白模型组相比,虎杖苷高、中剂量组及非诺贝特组均能明显降低血清TNF-α含量(P案。　　 本课题通过对多种NSCLC细胞系进行药物敏感性及信号通路相关的实验,观察EGFR-TKI和mTOR抑制剂联合应用的效果并探讨其联合作用的机制。　　 第一章 吉非替尼和依维莫司联合应用对肿瘤细胞增殖的抑制作用　　 方法　　 采用MTT增殖抑制实验对细胞进行单药药敏实验以及观察不同方式的同时及序贯用药的抑制效果,采用CalcuSyn分析软件计算综合指数(combinationindex,CI)。　　 建立多种单药或联合药物不同方案处理的细胞模型,采用western blot的方法检测多种靶向抑制剂对不同细胞模型的信号通路相关分子的影响。　　 结论　　 在对吉非替尼耐药和敏感的细胞系中,吉非替尼和依维莫司两药联合应用的方案可以增强单药的增殖抑制效果,抑制率随着药物剂量的增加而增大。但对于不同细胞系能达到最大抑制作用的联合方案有所不同；对于耐药细胞,两药同时的方案抑制效果更显著；对于敏感细胞,先给予依维莫司再给予吉非替尼的序贯方法抑制增殖效果最为明显。　　 所有细胞系中,同时和序贯方案在小剂量水平的联合都具有协同效应,但随着药物浓度增加,协同效应减弱甚至可表现为拮抗。　　 第二章 吉非替尼和依维莫司联合应用对信号通路的影响　　 方法　　 建立吉非替尼耐药细胞模型,以及用不同的小分子靶向抑制剂处理细胞的模型,采用western blot的方法观察处理后信号通路不同分子磷酸化的改变情况。　　 结论　　 在对吉非替尼敏感,原发或继发性耐药的的细胞系中,吉非替尼和依维莫司单药可抑制mTOR、EGFR、p70S6K等信号分子的磷酸化水平,联合应用的抑制效果优于任一单药。依维莫司对p-mTOR和p-p70S6K有明显的抑制作用,但对p-Akt或p-MAPK抑制作用不明显甚至可引起反馈性活化,联合吉非替尼可有效地抑制Akt和MAPK的磷酸化表达水平而且抑制p-MAPK的作用是仪作用于PI3K信号通路的小分子抑制剂所不能替代的。由此可见,吉非替尼和依维莫司两种药物在抑制信号通路中能够发挥互补作用,通过同时抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K和Ras/Raf/ERK/MAPK两条通路上的信号分子进一步影响蛋白质合成及功能,从而增强对肿瘤细胞的增殖抑制和杀伤作用。　　 全文结论　　 本文在多种对吉非替尼耐药和敏感的NSCLC细胞系中进行了吉非替尼与依维莫司同时及序贯方案联合应用的增殖抑制实验。在对吉非替尼耐药和敏感的细胞系中,吉非替尼和依维莫司两药联合应用的方案可以增强单药的增殖抑制效果,抑制率随着药物剂量的增加而增大。但对于不同细胞系能达到最大抑制作用的联合方案有所不同。　　 从协同效应的角度而言,两药联合应用在小剂量水平可呈现出协同效应,但协同效应随着剂量增加而减弱甚至可表现为拈抗。这些结果提示对药物敏感度不同的NSCLC患者,需要从联合用药的方案和药物剂量两个角度考虑才有可能达到有效而不良反应较少的给药方法。　　 采用western blot的方法分析了多种靶向药物单独或联合作用对PI3K/Akt/mTOR/p70S6K和Ras/Raf/ERK/MAPK两条通路上信号分子的影响,吉非替尼和依维莫司单药可抑制mTOR、EGFR、p70S6K等信号分子的磷酸化水平,联合应用时对这些位点的抑制作用进一步加强。吉非替尼可有效地弥补依维莫司对p-Akt和p-MAPK抑制作用不明显甚至可引起反馈性活化的缺点。　　 仅作用于PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路的多种靶向药物联合不能有效抑制MAPK磷酸化表达水平,只有联合吉非替尼才能有效抑制p-MAPK,说明了吉非替尼在靶向药物联合方案中的重要性。吉非替尼和依维莫司联合应用的方案可通过抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K和Ras/Raf/ERK/MAPK两条通路上的信号分子进一步影响蛋白质合成及功能,从而增强对肿瘤细胞的增殖抑制和杀伤作用。