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第一部分丝蛋白-壳聚糖支架的制备及其特性测定研究目的：探索一种更接近皮肤的组织工程支架材料,本实验拟采用溴化锂-水溶丝体系溶解丝素蛋白,制备丝素蛋白-壳聚糖共混支架。方法：采用了溴化锂-水溶丝体系溶解丝素蛋白,降低丝素蛋白分子的降解,将溶解壳聚糖的醋酸浓度减小到更低水平,以防止混合过程中的丝素蛋白分子的过快变性。本实验共制备了纯SF以及SF/CS比例3：1,6：1,9：1的共混材料。扫描电镜(SEM)观察制备的共混支架材料的表观和断而形态；Image J测量各支架孔径；测定各支架吸水率；通过电子拉力机对所制备材料的力学性能进行测试。结果：SEM观察到材料为内部多孔的海绵状结构,断面均匀且没有宏观分相的情况出现。随着SF的浓度增大,所制备的SF/CS共混支架材料的孔径大小从120±18.2um逐渐减小到52.1±4.8gm。纯的SF支架则需要大于5min的时间；而不同比例的SF/CS共混支架材料在1-3min都达到了溶胀平衡。机械强度测试提示SF/CS多孔共混支架材料均具有较好的断裂强度和一定的柔韧性能,纯SF材料的强度最大,为430±54kPa。结论：采用溴化锂-水溶丝体系将丝素蛋白和壳聚糖进行共混,共混支架材料具备较好的力学性能,在SEM的断面图上没有出现宏观的组分间相分离；吸水速率大幅度提升；机械强度测试提示SF/CS多孔共混支架材料均具有较好的断裂强度和一定的柔韧性能。第二部分脂肪干细胞的分离、培养、鉴定研究目的：从SD大鼠腹股沟处脂肪提取脂肪干细胞,了解脂肪干细胞是否具有多向分化的潜能。方法：自SD大鼠(7周龄,体重190+21.4g)的大鼠双侧腹股沟处切取脂肪组织约5g,经常规酶消化法提取脂肪干细胞,观察其细胞形态,并绘制生长曲线；采用单克隆抗体标记ADSCs,然后采用流式细胞仪测定十细胞表面标志物CD29、CD34、CD44、CD90;通过诱导分化剂的诱导,将ADSCs诱导分化成脂、成骨,通过油红“O”染色、茜素红染色和Von kussa染色了解干细胞成脂、成骨情况。结果：SD大鼠腹股沟脂肪分离培养的细胞,具有干细胞的形态和特性,经流式细胞仪检测其表面标志物的表达为CD29,CD44, CD90呈阳性表达,阳性率分别为93%,98%,96%,而CD34表达呈阴性表达(0%)：经定向诱导,发现ADSCs具有成脂、成骨多向分化的潜能。结论：脂肪十细胞(ADSCs)分离培养简单,获取容易,具有较好干细胞特性,传代稳定。第三部分脂肪干细胞与丝蛋白-壳聚糖材料体外培养和生物学活性的研究研究日的：采用溴化锂-水溶丝体系制备的纯SF及SF/CS比例3：1,6：1,9：1的共混材料,与ADSCs共培养,观察不同支架上ADSCs的生长状态及增殖情况。方法：ADSCs与纯SF及SF/CS共混材料共培养,分别在细胞培养的第1、3、7、10d时间CCK-8测定细胞增殖情况,第10d时,trizol法提取支架上细胞的RNA,用RT-PCR法检测其Ki67的表达量。将细胞浓度为5×104/ml的ADSCs与材料在体外共同培养,电镜下观察ADSCsl均生长情况。结果：ADSCs在第1、3、7、10dd增值过程中,SF/CS共混材料3：1组最接近对照组,在第1、3、7、10d其增值速度明显快于6：1组,9：1组及纯SF组,其中纯SF组ADSCs增殖速度最慢, P<0.05,差别有显著性。RT-PCR结果提示SF/CS比例3：组相对定量值为1.27±0.46,6：1组为0.74±0.23,9：1组为0.67±0.31,纯SF组为0.43±0.19。ADSCs在SF/CS共混材料上培养的第3d,扫描电镜观察提示,细胞形态呈长梭形,表面光滑,形态完整,伸出较多足突与SF/CS共混材料黏附紧密。结论：SF/CS共混材料与ADSCs生物相容性好,其中3：1组ADSCs增值速率明显高十6：1组,9：1组及纯SF组。