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背景:卵巢癌是目前为止仍难以早期发现且病死率最高的妇科恶性肿瘤。由于缺乏有效的筛查和靶向治疗手段,晚期上皮性卵巢癌患者的5年生存率仅为30%。生物钟基因在肿瘤的发生发展中起重要作用。NR1D1是生物钟的一个配体调控核受体,也是转录因子,能够调控多种生物学过程。NR1D1参与肿瘤的发生发展,并与肿瘤的不良预后和化疗敏感性有关。通过肿瘤基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库发现NR1D1在正常卵巢组织中高表达,在卵巢癌组织中低表达,但其在卵巢癌中的具体作用机制尚不清楚。细胞因子信号抑制因子3（Suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3）与卵巢癌的预后呈正相关,SOCS3的表达沉默能够增强卵巢癌细胞的迁移和增殖能力,而过表达则相反。查阅TCGA数据库发现在卵巢癌中NR1D1与SOCS3的表达呈正相关。通过JASPAR网站分析,在SOCS3的启动子区域存在多个NR1D1结合位点,表明NR1D1可以调控SOCS3的转录。SOCS3是JAK激酶（Janus kinase,JAK）/信号转导与转录激活因子3（Signal converter and activator of transcription 3,STAT3）信号通路的抑制因子。JAK/STAT3信号通路具有促进肿瘤细胞增殖和抑制凋亡的作用,它的激活对包括上皮性卵巢癌在内的肿瘤细胞的增殖和凋亡十分重要,但NR1D1是否通过SOCS3/JAK/STAT3信号通路抑制上皮性卵巢癌的增殖尚待研究。目的:本研究通过探讨NR1D1的表达水平与卵巢癌患者临床转归的关联及其在卵巢癌细胞系和实验动物体内的作用,分析SOCS3和STAT3的表达与卵巢癌患者临床病理参数之间的关系,通过卵巢癌细胞模型和动物实验分析NR1D1、SOCS3和JAK/STAT3信号通路之间的关系,明确NR1D1与SOCS3/JAK/STAT3信号通路在卵巢癌增殖中的作用。方法:1.通过细胞培养、免疫组化染色、q RT-PCR和western blot检测NR1D1在上皮性卵巢组织和细胞系中的表达水平,分析NR1D1的表达水平与上皮性卵巢癌患者临床病理参数之间的关系。通过比例风险模型（cox）分析影响卵巢癌患者预后的因素。2.通过NR1D1过表达质粒和NR1D1-sh RNA构建过表达和敲低NR1D1的卵巢癌细胞模型。通过CCK-8实验、PCNA细胞增殖实验、细胞免疫荧光染色、caspase-3活性检测、caspase-9活性检测、流式细胞技术、western blot等方法检测NR1D1对卵巢癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。3.利用裸鼠建立NR1D1过表达卵巢癌皮下瘤模型,通过HE染色和TUNEL法检测皮下瘤组织坏死和细胞凋亡情况,皮下瘤组织免疫荧光染色检测细胞增殖活性。4.通过细胞培养、免疫组化染色、q RT-PCR和western blot检测SOCS3在上皮性卵巢组织和细胞系中的表达水平,分析SOCS3和STAT3的表达与上皮性卵巢癌患者临床病理参数之间的关系。通过q RT-PCR和western blot检测过表达与敲低NR1D1卵巢癌细胞和上皮瘤中SOCS3的表达水平,明确NR1D1对SOCS3的作用。通过western blot检测过表达与敲低NR1D1的两种卵巢癌细胞系和卵巢癌皮下瘤中JAK、STAT3的表达水平,明确NR1D1对JAK/STAT3信号通路的作用。构建过表达NR1D1与敲低SOCS3共转染卵巢癌细胞模型,通过CCK-8、流式细胞技术和western blot检测共转染卵巢癌细胞模型的增殖、凋亡以及STAT3表达水平,明确NR1D1、SOCS3和JAK/STAT3信号通路在卵巢癌增殖中的关系。结果:1.NR1D1在上皮性卵巢癌细胞和组织中表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞和输卵管组织。卡方检验分析结果表明,NR1D1表达水平与卵巢癌患者的临床病理组织学分级呈正相关,与FIGO分期和淋巴结转移呈负相关。Kaplan-Meier生存曲线结果显示NR1D1高表达组患者的5年生存率明显高于NR1D1低表达组患者。Cox分析结果显示NR1D1表达水平是影响卵巢癌患者临床预后的独立因素。2.利用构建的过表达与敲低NR1D1卵巢癌细胞模型,通过CCK-8实验和PCNA细胞增殖实验结果显示过表达NR1D1的卵巢癌细胞增殖能力明显减弱,而敲低NR1D1的卵巢癌细胞增殖能力明显增强。流式细胞技术检测细胞周期结果显示过表达NR1D1的卵巢癌细胞G1期细胞比例明显增高,western blot结果显示cyclin D和cyclin E水平明显降低,而敲低NR1D1的卵巢癌细胞G1期细胞比例明显降低,western blot结果显示cyclin D和cyclin E水平明显升高。流式细胞技术检测过表达NR1D1的卵巢癌细胞凋亡率明显升高,caspase-3和caspase-9活性明显增强,而敲低NR1D1的卵巢癌细胞凋亡率明显降低。3.裸鼠皮下瘤实验结果显示,NR1D1过表达组皮下瘤的生长速度明显低于对照组,皮下瘤的体积和重量明显低于对照组。HE染色结果显示NR1D1过表达组有明显的凋亡和坏死区域。TUNEL法检测结果显示NR1D1过表达组有更多的TUNEL阳性细胞。免疫荧光检测结果显示NR1D1过表达组Ki-67水平更低。4.SOCS3在上皮性卵巢癌细胞和组织中表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞和输卵管组织。卡方检验分析结果表明,SOCS3的表达与卵巢癌的临床病理组织学分级呈正相关,与FIGO分期和淋巴结转移呈负相关,p-STAT3的表达与组织学分级呈负相关,与FIGO分期和淋巴结转移呈正相关。过表达NR1D1的卵巢癌细胞中SOCS3表达水平明显升高,p-JAK1、p-JAK2和p-STAT3表达水平明显降低,而敲低NR1D1的卵巢癌细胞中SOCS3表达水平明显降低,p-JAK1、pJAK2和p-STAT3表达水平明显升高。过表达NR1D1的皮下瘤中SOCS3表达水平明显升高,p-JAK1、p-JAK2和p-STAT3表达水平明显降低,而t-JAK1、t-JAK2和t-STAT3表达水平无明显变化。在NR1D1过表达的两种卵巢癌细胞系中,pJAK1、p-JAK2和p-STAT3表达水平明显下降,t-JAK1、t-JAK2和t-STAT3水平无明显变化。在NR1D1敲低的两种卵巢癌细胞系中,p-JAK1、p-JAK2和p-STAT3水平明显升高,t-JAK1、t-JAK2和t-STAT3水平无明显变化。在NR1D1过表达的皮下瘤中,p-JAK1、p-JAK2和p-STAT3水平明显降低,t-JAK1、t-JAK2和tSTAT3水平无明显变化。过表达NR1D1与敲低SOCS3的共转染卵巢癌细胞的增殖能力明显增强,细胞凋亡率明显降低,p-STAT3表达水平明显降低。结论:1.NR1D1在上皮性卵巢癌中低表达,与卵巢癌患者的临床病理组织学分级、FIGO分期和淋巴结转移相关,NR1D1表达水平与卵巢癌患者的预后呈正相关。2.NR1D1通过上调SOCS3的表达,抑制JAK/STAT3信号通路的激活,诱导细胞周期阻滞并促进凋亡,从而抑制卵巢癌增殖。3.NR1D1在卵巢癌中发挥抑癌作用,有可能成为上皮性卵巢癌潜在的治疗靶点和预后指标。