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研究目的： Ⅰ型糖尿病（Type I Diabetes，T1D）的发病率在世界范围内持续上升，同时患病人群日益趋于低龄化。糖代谢紊乱严重损害男性生殖系统，导致男性精子数目降低以及高水平的精子死亡。睾丸局部血液循环障碍及血管炎性损害，代谢产物积聚以及氧化应激促使局部炎性浸润，可能是T1D患病男性生殖系统损害的病理生理机制。MFG-E8分子分布广泛，其生物学功能涉及凋亡细胞的吞噬性清除、促进血管生成及表皮重建，MFG-E8缺陷不仅延缓死亡细胞清除，并且改变吞噬细胞吞噬内处理过程导致自身抗原呈递加强。固有免疫系统参与睾丸局部炎性反应，中性粒细胞浸润与抗炎效应密切相关，而中性粒细胞死亡释放的自身抗原物质过多暴露引发自身免疫反应。本实验将探究MFG-E8能否减轻T1D模型小鼠精子炎性损害，并探究MFG-E8缓解糖尿病炎症环境下雄性生殖损害的免疫反应机制。 研究方法： 1.T1D小鼠模型建立：将实验WT及MFG-E8-/-小鼠分别随机分成对照组及实验组,四组小鼠每组10~12只，对照组WT及MFG-E8-/-小鼠腹腔注射柠檬酸钠缓冲液,实验组WT及MFG-E8-/-小鼠采用腹腔注射STZ破坏小鼠胰岛，注射持续5d。连续15d监测体重和饮水饮食以及血糖变化。 2.精子采集及胰脏、睾丸附睾收集：剪取小鼠一侧附睾尾及相邻一段输精管置于培养箱孵育1h促使精子游出，并通过显微镜检测精子动能。剪取一侧睾丸-80℃保存，剪取胰脏及另一侧睾丸附睾组织进行组织甲醛固定。 3.胰脏、睾丸附睾病理检查：将甲醛固定的各组小鼠胰脏及睾丸附睾进行组织切片。胰脏组织切片进行H&E染色、睾丸附睾组织进行H&E染色及切片作后续免疫检测。 4.睾丸组织总蛋白免疫印迹(western blot)检测：睾丸组织蛋白抽提，并检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2蛋白及各组MFG-E8蛋白的表达变化。 5.TUNEL检测睾丸附睾组织凋亡：各组睾丸附睾组织石蜡切片荧光显微镜下检测睾丸组织内部凋亡情况及凋亡细胞计数评分。 6.睾丸附睾组织中性粒细胞外诱捕网(NETs)检测：各组睾丸附睾组织石蜡切片荧光显微镜下观察NETs释放情况。 7.荧光显微镜检测睾丸附睾组织循环免疫复合物CICs沉积：各组睾丸附睾组织石蜡切片荧光显微镜下观察CICs沉积情况，检测睾丸附睾组织生精小管、血睾屏障及管间间质血管CICs沉积情况。 研究结果： 1.T1D模型小鼠血糖升高达到200mg/dl、体重急剧下降、胰脏胰岛弥漫性血肿，胰岛β细胞尽数破坏，造成胰岛组织急性坏死性炎症，促使短时间内胰岛素枯竭。 2.MFG-E8缺陷加重T1D模型小鼠睾丸炎症反应，睾丸STZ处理实验组睾丸萎缩、外层筋膜表面充血性毛细血管分布。病理切片HE染色病理切片分析STZ处理组曲精小管间质充血，尤其MFG-E8-/--STZ组呈现充血严重以及铁血黄素-巨噬细胞沉积等病理现象。生精小管内壁可见精原细胞脱落，各级精母细胞层次丢失严重，生精小管管腔内精子紊乱。 3.MFG-E8缺陷导致T1D小鼠精子活力减弱，发现MFG-E8-STZ组精子活力(15.93±1.43，9),(平均值±标准差，数量)相较于WT-STZ组精子活力(35.79+1.04，10)下降更加显著。 4.MFG-E8缺陷致使T1D小鼠睾丸内凋亡相关蛋白表达增高以及精原细胞凋亡沉积加剧。 5.MFG-E8缺陷致使T1D小鼠睾丸内部免疫复合物CICs沉积加剧。 研究结论： T1D小鼠睾丸内部生精细胞的凋亡加剧及精子活力的下降，MFG-E8缺陷致使NETs的释放增加以及暴露自身免疫性抗原物质，造成免疫复合物(CICs)的沉积加剧，睾丸组织局部炎性反应加剧，炎性介质造成生精微环境变化，从而损害生精能力及精子功能。