三色堇(Viola tricolor)是世界上著名的草本花卉,被誉为“花坛皇后”,耐寒喜凉爽气候,适宜的生长温度在14~25℃,夏季高温对三色堇生长发育产生不利影响,导致观赏价值降低,较长时间高温胁迫甚至会导致植株死亡。非生物胁迫耐受的分子调控机制依赖于特定相关基因的激活和调控。植物热激转录因子(Heat stress transcription factor,HSF)在高温胁迫响应和赋予胁迫耐受性中起着至关重要的作用。本试验利用耐热性较好的三色堇自交系DFM-16和热敏感自交系08H作为研究材料,利用RACE技术从叶片中分离了VtHSFB2b基因,比较分析了这两个材料中该基因的序列结构及高温应答表达水平的特征,并通过亚细胞定位及拟南芥遗传转化方法研究该基因的功能。主要研究结果如下:1.DFM-16材料中VtHSFB2b基因cDNA序列是1439 bp,08H材料中VtHSFB2b基因cDNA序列是1397 bp,两个材料中VtHSFB2b基因的开放阅读框长度相同均为975 bp,但存在24个碱基的差异,两者预测编码的324个氨基酸中也相应存在6个氨基酸差异,其氨基酸序列的相似性达到98.15%。VtHSFB2b含有HSF保守的DBD结构域,同模式植物拟南芥HSF的所有成员相比,与拟南芥HSFB2b同源性最高、亲缘关系最近。生物学信息分析,也表明其有着与热激转录因子相同的特点。2.利用实时定量荧光PCR技术,对VtHSFB2b的表达量进行分析,两个材料叶片中VtHSFB2b基因表达模式相似,均受高温胁迫诱导。42℃热激处理0.5 h时VtHSFB2b表达水平开始上升,在1h时表达量达到顶峰,且DFM-16材料的表达量要远高于08H材料表达量,随后在2 h时两者的表达水平明显下降,在12 h时DFM-16材料的表达降低至与对照相同的水平,但08H材料表达量仍高于对照。3.在洋葱表皮细胞中的瞬时表达分析表明,VtHSFB2b定位在细胞核中,与利用在线软件预测定位在细胞核的结果一致,进一步表明该基因编码蛋白可能起着转录调控作用。以pJIBIA163-1300为载体,以VtHSFB2b基因cDNA为靶基因片段,构建了VtHSFB2b-pJIBIA163-1300植物表达载体并转入拟南芥,成功筛选出转基因拟南芥T1代植株。