猪脾转移因子(TF)的制备、生物活性测定及应用研究

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本研究以健康猪脾为原料,采用pH值调节-超滤法制备的脾转移因子(TransferFactor,简称TF),生产工艺简单,不需特殊设备及试剂,生产成本低廉,符合中华人民共和国药典生物制剂标准。试验结果表明:pH值调节-超滤法制备的猪脾转移因子pH值为7.00,经紫外光谱分析,猪脾转移因子在250-260处有峰值,A260/A280=2.25;用二羟基甲苯法测得核糖含量为33.51ml;用双缩脲法测得多肽含量为313.82ml;高效液相色谱仪测定氨基酸含量,游离氨基酸相对百分含量依次以谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、苏氨酸和丙氨酸含量最高,而半胱氨酸、精氨酸、组氨酸、蛋氨酸、酪氨酸和赖氨酸的含量相对较少。向小白鼠体内注射相当于60倍于人的应用剂量(浓缩6倍)时,小白鼠也没有任何毒性反应,证明转移因子安全和无毒性。注射猪脾转移因子注射液后,试验兔体温变化均小于0.6℃,热源试验结果为阴性。外周血涂片用改良酯酶法染色后,在油镜下镜检,并进行分类计算,计算T细胞比值,试验组注射猪脾转移因子前T细胞为48.9±4.2%,注射猪脾转移因子后T细胞值为61.5±2.8%;注射前后T细胞增殖差异极显著(p<0.01)。无菌试验、过敏试验、抗原检验结果均为阴性。pH值调节-超滤法制备的猪脾转移因子对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑制作用很强,呈高度敏感,抑菌圈直径分别为25±1.0mm和40±1.0mm;对巴氏杆菌抑制作用较强,呈中度敏感,抑菌圈直径为15±1.0mm;对链球菌抑制作用较弱,呈低度敏感,抑菌圈直径为12±1.0mm。猪脾转移因子对小白鼠腹腔Mφ的吞噬百分率和吞噬指数试验组与对照组相比有显著的升高,经统计学t检验,差异极显著(P<0.01);但猪脾TF对小白鼠的脾重无显著影响。采用转移因子致敏制备鸡抗猪瘟高免卵黄抗体,同时用猪瘟活疫苗多次免疫长沙黄母鸡,收集第5次免疫后的鸡蛋,用聚乙二醇6000(PEG 6000)置换法获得了纯度较高的抗猪瘟高免卵黄抗体。试验结果表明:用此法获得的抗猪瘟高免卵黄抗体性质稳定、无杂菌生长、抗体效价高(第5次免疫后卵黄抗体效价滴度为1:128)、无任何毒副作用;临床治疗试验结果表明:使用转移因子致敏制备的鸡抗猪瘟高免卵黄抗体对早、中期猪瘟治疗效果比使用中等剂量的猪瘟弱毒苗效果好,且差异极显著(P<0.01)。以猪脾转移因子作猪蓝耳病疫苗的免疫增强剂,观察其对猪蓝耳病疫苗的免疫影响,试验结果表明:单独使用蓝耳病疫苗免疫猪群,抗体出现时间较晚,免疫后28天,抗体OD650值为0.51,S/P值为0.77,才呈阳性,产生保护作用;而辅佐TF2mg/头以上,抗体产生时间明显提前,免疫后14天既能产生有效保护,且抗体效价和S/P值均极显著的高于单独使用蓝耳病疫苗免疫的对照组(P<0.01),这说明TF是一种对猪蓝耳病疫苗十分有效的佐剂。
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