猪毛与猪肉中CBL残留量关系的研究

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1964年盐酸克伦特罗(CBL)在美国首次合成并获得专利。在临床上作为支气管解痉药物。20世纪80年代初,美国脂胺公司研究发现,当CBL的使用剂量达到治疗量的5—10倍时,具有能量重分配作用,可增加动物瘦肉率,降低骨骼肌脂肪。但在随后的数年里,国内外发生的多起CBL中毒事件触目惊心。在我国,CBL残留监测以ELISA作为筛选方法,GC/MS作为确证方法。检测对象主要为饲料、猪尿、猪肉和猪肝,但都不同程度的存在采集、保存、运输,检测周期长的缺点,为此,我们研究了毛发中CBL残留量GC/MS检测方法以及毛发与肌肉中CBL残留量的关系,为使CBL在动物体内残留的监测更科学、更准确、更便捷打下基础。主要工作归纳如下:(1)首先选择小白鼠作为毛发中CBL残留量检测的实验动物,以最明显的心肌损害为指标的最大无作用剂量连续灌胃30天,制作慢性中毒小鼠模型,在不同时间分别采集样本,用GC/MS检测。并对拔取和剪取两种采样方式进行比较。在实验过程中尝试了不同的提取溶液和不同的提取时间,最终找到了最佳的提取方式,并对检测结果的稳定性、重复性、精密度,线性、回收率等方法学验证指标进行了评价,结果另人满意。(2)对毛发和肌肉中CBL残留量检测方法从采集样本—样本的前处理—GC/MS对衍生液的检测—检测结果的计算的全过程进行了方法不确定度影响因素的研究。结果显示:衍生液体积、采用拟合标准曲线和对照液浓度计算样品溶液浓度及重复性引入的不确定度较大,建议在实际检测中,要注意检测环境温度的控制,还可以选择与样品液浓度接近的对照溶液进行单点校正计算结果。(3)在采集小鼠毛发样本的同时,采集了小鼠的肝肾、肌肉与毛发同时检测,检测从灌胃第九天起延续到停药后的30天,雌雄分别检测。结果发现小鼠毛发、肝肾和肌肉中CBL残留量按浓度大小依次为:毛发>肝肾>肌肉;相同样本雌鼠高于雄鼠;残留量达到峰值的时间,雄鼠早于雌鼠。各样本CBL的降解速度由快到慢为肌肉>毛发>肝肾,且雌鼠高于雄鼠。(4)在以上基础上,以育肥猪为验证对象,制作慢性中毒模型,分别在不同的时间点采集肝肾、肌肉样本,验证(3)中的蓄积与降解趋势。结果猪体内毛发、肝肾和肌肉中CBL残留量按浓度大小依次为:毛发>肝肾>肌肉;相同样本雌性猪高于雄性猪;到达峰值的时间,雌雄猪无明显差异,但不同组织到达峰值的时间由快到慢为肝肾>肌肉>毛发,降解速度由快到慢为肌肉>肝肾>毛发。因此,以毛发作为检测对象不仅样品易采集,易保管,易运输,不需特殊保藏设施而且能反映所有的CBL暴露史。从毛发与肌肉中CBL残留量关系来看,毛发中的CBL的残留量无论是在蓄积阶段,还是在降解阶段,始终高于肌肉,可以在很大程度上提高检测数据的准确性和可靠性,更重要的是猪毛检测可以在活体状态下进行,这点对于动物源性食品安全监测意义重大,解决了宰后进行食品安全监测,检测结果滞后于食品上市的矛盾。
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