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背景:随着慢性肾脏病发病率的日益增高,如何降低其发病率甚至延缓其进展开始成为人们普遍关注的问题。肾间质纤维化（RIF,renal interstitial fibrosis）作为慢性肾脏病进展至终末期肾脏病的共同病理过程,目前被认为是解决这一难题的有效切入点。单侧输尿管梗阻（UUO,unilateral ureteral obstruction）模型是研究RIF较为常用的模型之一,过去也有研究报导单侧输尿管梗阻再通（R-UUO,relief of unilateral ureteral obstruction）模型是研究肾脏损伤、修复以及观察药物疗效较为理想的模型,但研究所使用的动物多为龋齿类动物。鉴于龋齿类动物与哺乳动物的明显差别,因此本研究团队在初期实验中,选用微型猪作为实验动物,提出并成功构建了哺乳动物R-UUO模型。研究结果显示在梗阻5天、7天后解除输尿管梗阻,UUO诱导的肾脏损伤可以自然恢复,但梗阻5天与7天再通后肾脏病理动态变化差别不明显,而且梗阻10天之后肾脏损伤难以恢复。以上研究结果表明微型猪UUO诱导的肾脏损伤可以自我恢复,但确切的可逆性修复的时间节点仍有待进一步研究。通过对早期研究的思考与分析,我们意识到了其中存在的一些问题并对研究方案进行了适当完善:首先将梗阻时间范围扩展到3至10天,其次,获取组织标本的方式由开腹手术切割肾组织改为肾穿刺活检针取组织。此研究一方面通过动态观察梗阻不同时间再通前后肾脏的自然恢复情况,明确UUO所致RIF可逆性修复的时间节点;另一方面通过选取合适的R-UUO时间点,给予微型猪R-UUO模型新型抗纤维化药物F-86治疗,同时以抗纤维化药物吡啡尼酮（PFD,Pirfenidone）作为阳性对照,探讨化合物F-86的抗纤维化作用及其可能的作用机制。目的:一方面明确微型猪UUO所致RIF可逆性修复的时间节点,为临床上判断UUO所致RIF的预后提供理论依据;另一方面探讨新型化合物F-86的抗纤维化作用及其可能的作用机制,为慢性肾脏病的抗纤维化治疗提供新的治疗策略。方法:本研究分为2个阶段,第一阶段主要观察微型猪R-UUO模型在梗阻不同时间后再通,肾脏损伤的自主恢复情况。选择实验用体重8-10kg的雄性微型猪,首先将其随机分为以下3组:梗阻3天组、梗阻7天组、梗阻10天组（每组5头微型猪）。适应性喂养1周后对上述微型猪行UUO手术,之后根据实验设计于不同时间点进行R-UUO。并于再通后3天、7天、14天、28天留取实验动物左、右分肾静脉及前腔静脉的血液标本,并在直视下行肾穿刺活检术留取肾组织标本。第二阶段首先根据第一部分实验结果,确定合适的R-UUO时间点。将实验用体重8-10kg的雄性微型猪随机分为以下5组:假手术组、假手术+F-86组、梗阻再通组、梗阻再通+PFD组、梗阻再通+F-86组（每组5头）。构建R-UUO模型,并于梗阻再通后第一天开始给予药物灌胃处理,其中F-86治疗组给予F-86 150mg/kg灌胃,PFD治疗组予以PFD 500mg/kg灌胃,其它组予以等剂量溶媒灌胃,每天一次,连续14天,再通28天处死微型猪。分别于梗阻0天（梗阻前）、再通0天（再通）、再通3天、再通7天、再通14天、再通28天暴露肾脏行肾穿刺活检术留取梗阻侧肾脏组织,同时收集左、右分肾静脉及前腔静脉的血液,收集的血液样本采用ELISA方法按照血清肌酐及尿素氮检测试剂盒说明书进行检测,用以评价肾功能;采用过碘酸雪夫染色（PAS,Periodic acid–Schiff）及Masson染色观察肾脏组织的病理学改变,免疫组化及western blot方法检测肾小管上皮细胞间充质转化（如E-cadherin、zonula occludens-1（ZO-1）、α-smooth muscle actin（α-SMA）、vimentin）、细胞外基质胶原沉积（如Collagen-Ⅰ）以及转化生长因子β1信号通路（如transforming growth factor beta 1（TGF-β1）、bone morphogenetic protein-7（BMP-7）等）相关蛋白的表达变化。结果:（1）微型猪进行UUO处理后,肾功能（血清肌酐及血尿素氮水平）虽无统计学差异（P>0.05）,但UUO所诱导的肾脏损伤在梗阻3天、7天及10天组呈现明显不同的改变。病理组织染色以及肾间质纤维化相关指标如肾小管上皮细胞间充质转化（E-cadherin、ZO-1、α-SMA、vimentin）、细胞外基质胶原沉积（Collagen-Ⅰ）以及转化生长因子β1信号通路（TGF-β1、BMP-7）免疫组化及Western blot结果显示:至再通28天,梗阻3天组基本上完全恢复至梗阻前水平,梗阻7天组大部分恢复,而梗阻10天组难以恢复。（2）与假手术组相比,假手术+F-86处理组血清肌酐及血尿素氮水平无明显升高;PAS染色及Masson染色结果显示:与梗阻再通组相比,梗阻再通+PFD及梗阻再通+F-86治疗组可以促进损伤肾小管的修复,显著减少肾间质胶原沉积,并且梗阻再通+F-86治疗组肾小管再生较明显。（3）免疫组化显示:与假手术组相比,单侧输尿管梗阻后Ecadherin、ZO-1、α-SMA、vimentin、Collagen-Ⅰ、TGF-β1、BMP-7出现不同节奏、不同程度的变化;与梗阻再通组相比,梗阻解除后,上述指标有不同程度的恢复,随着再通时间的延长,F-86及PFD治疗组可能促进该过程的恢复。（4）Western blot结果可见:至再通28天,比较各组间E-cadherin、ZO-1、α-SMA、vimentin、Collagen-Ⅰ、TGF-β1、BMP-7、Smad7及TGF-β/Smads下游相关蛋白,未见明显差异。结论:（1）微型猪单侧输尿管梗阻再通模型肾损伤可逆性修复的时间节点在梗阻7天至梗阻10天之间。（2）F-86可以减轻微型猪单侧输尿管梗阻再通所致的EMT和细胞外基质沉积,促进微型猪单侧输尿管梗阻再通后肾间质纤维化的恢复;F-86改善肾纤维化的作用可能是通过促进BMP-7、Smad7的表达对抗TGF-β1/Smads信号通路来实现的。