整合素β1反义寡核苷酸对宫颈癌HeLa细胞体外增殖的影响

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目的:利用整合素β1反义脱氧寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN)封闭宫颈癌HeLa细胞的整合素β1基因,观察其对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及HeLa细胞整合素β1表达情况,探讨整合素β1在宫颈癌发生、发展中可能的作用。方法:1.利用脂质体介导核苷酸序列转染宫颈癌HeLa细胞。实验分整合素β1反义寡核苷酸序列+脂质体组(ASODN组)、随机寡核苷酸序列+脂质体组(RODN组)、脂质体组、空白对照组(HeLa细胞组)。2.采用WST-1法检测转染整合素β1反义寡核苷酸后不同时间段宫颈癌HeLa细胞增殖情况。3.利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞整合素β1mRNA的表达。4.Western blot技术检测各组细胞整合素β1蛋白的表达。5.流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡。6.所得各组数据均以均数±标准差(x±s)表示,由SPSS17.0统计软件进行方差分析(F检验)和t检验,以P<0.05为有统计学差异。结果:1.反义寡核苷酸(ASODN)转染24小时即可对宫颈癌HeLa细胞生长产生抑制,作用24小时、48小时、72小时ASODN组抑制率分为:26.17%,39.78%,45.6%,RODN组抑制率分别为:7.41%,2.73%,2.58%,脂质体组抑制率分别为:4.47%,2.36%,2.21%。由此可见反义寡核苷酸(ASODN)对宫颈癌HeLa细胞的生长有明显抑制作用,且呈时间依赖性,随着作用时间延长抑制作用增强。2.转染整合素β1反义寡核苷酸48小时可使HeLa细胞的整合素β1mRNA表达水平明显降低,作用48小时、72小时ASODN组的整合素β1mRNA表达分别为:0.8659±0.0647,0.5950±0.0066,明显低于HeLa细胞组,差异有统计学意义(P<0.05)。脂质体组和RODN组分别在相同时间点与HeLa细胞组相比,整合素β1mRNA表达水平有降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。ASODN组在24小时、48小时、72小时三个时间点整合素β1mRNA表达分别为1.367±0.01221,0.9361±0.009,0.6981±0.0075,结果表明反义寡核苷酸能特异性封闭整合素β1基因。3.转染整合素β1反义寡核苷酸72小时后,宫颈癌HeLa细胞整合素β1蛋白由1.0900±0.0367降低为0.8370±0.0650,与RODN组、脂质体组、HeLa细胞组相比,差异有统计学意义(P<0.05),RODN组、脂质体组与HeLa细胞组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。4.转染整合素β1反义寡核苷酸组HeLa细胞48小时后其生长周期被阻滞在G2/M期,ASODN组、RODN组、脂质体组、HeLa细胞组G2期细胞比率分别为:(32.20±1.8)%,(15.16±0.5)%,(13.80±1.0)%,(13.23±0.6)%,ASODN组与HeLa细胞组比较,差异有统计学意义(P<0.05);脂质体组和RODN组与HeLa空白组相比较,细胞周期无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。5.ASODN组细胞随着转染后时间的延长,其凋亡率逐渐增加,相同时间点分别与HeLa细胞组相比较,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:1.宫颈癌HeLa细胞株上有整合素β1的表达;2.抑制宫颈癌HeLa细胞株整合素β1基因和蛋白的表达,可有效抑制癌细胞增殖,促进细胞凋亡;3.整合素β1反义寡核苷酸可将宫颈癌HeLa细胞的周期阻滞在G2/M期。
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