【摘 要】
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我们以绿脓杆菌主动外排系统中最为常见而且最重要的MexA-MexB-OprM型外排泵的外膜蛋白OprM为靶点,进行专一性的外排泵抑制剂的筛选.首先利用分子生物学手段,用PCR方法从标准
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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我们以绿脓杆菌主动外排系统中最为常见而且最重要的MexA-MexB-OprM型外排泵的外膜蛋白OprM为靶点,进行专一性的外排泵抑制剂的筛选.首先利用分子生物学手段,用PCR方法从标准绿脓杆菌PAO1中得到外排泵外膜蛋白基因oprM,连接到表达载体pMMB67EH中,并在大肠杆菌HS151中进行OprM蛋白的表达,该大肠杆菌HS151是一株来自于W3110,但专一缺失了与OprM蛋白同源的大肠杆菌外膜TolC蛋白的表达菌株.利用这株表达OprM蛋白的大肠杆菌HS151,建立了一个作用于外排泵外膜OprM蛋白的药物筛选模型,此模型应用于绿脓杆菌外排泵的专一抑制剂的筛选.对从不同地区、不同植被环境的土壤中分离到的放线菌和真菌,采用不同碳源、氮源和其它营养成分的发酵培养基4-6种进行初筛发酵,累主应用此模型筛选放线菌和真菌发酵液样品1600个,其中获得阳性菌株56个,阳性率约为3.5﹪左右.
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