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目的:癌症是人类的首要死因,乳腺癌是全球女性中最为常见的恶性肿瘤。TMEM16A是一种Ca2+激活的Cl-通道（Ca CC）,是拥有十个成员的TMEM16家族中的一员,与包括乳腺癌在内的多种癌症密切相关。近年来发现TMEM16A参与乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,是一个潜在的重要治疗靶点。他汀类药物是目前临床应用最广泛的降脂类药物,对包括乳腺癌在内的多种肿瘤的发生具有抑制作用,但目前这些作用的生物学机制尚未完全明确。本实验选取辛伐他汀作为他汀类的代表性药物进行探究,发现辛伐他汀是TMEM16A的抑制剂,进而寻找二者可能的结合位点。同时对比不同他汀类药物（亲脂性和亲水性）对TMEM16A电流、乳腺癌细胞增殖和乳腺癌患者预后的影响,为研究TMEM16A和他汀类药物的作用机理提供帮助,同时也为治疗乳腺癌提供新的思路。研究方法:1.用瞬时转染的方式将TMEM16A质粒转染至HEK293细胞中,用全细胞膜片钳技术检测处理过的细胞中的TMEM16A钙激活氯电流。记录分别加入不同浓度辛伐他汀药物处理后,TMEM16A电流的变化情况。抑制率数据用Hill函数拟合,得到IC50值。用同样的转染方式和膜片钳技术检测10μM以及50μM辛伐他汀对TMEM16B电流的抑制情况,并与前者进行对比。根据本实验室前期的研究结果,将突变后影响辛伐他汀抑制率的TMEM16A单突变位点分别进行双突变和同时三突变,并对这些位点在TMEM16B中进行反向突变,进行给药抑制率验证并对比,结果进一步验证这几个位点的作用。2.用全细胞膜片钳技术检测10μM辛伐他汀、洛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、瑞舒伐他汀、普伐他汀对TMEM16A电流的抑制情况。用CCK-8试剂检测T47D乳腺癌细胞在10μM不同他汀药物处理48小时后的增殖情况,并进行对比。3.在Pub Med,EMBASE,Web of science,Cocharane Library数据库中检索,根据PICO原则设定检索式,筛选所有文献,最终纳入符合标准的六篇研究。使用Stata/MP 16.0进行数据分析,提取HR和Cis计算出他汀类药物和乳腺癌特异性死亡率、全因死亡率之间的关系,为符合归一化分布,对每项研究的HR数据都进行了对数转换。由于所得结果I~2＞50%存在异质性,故采用随机效应模型汇总结果。结果:1.将不同浓度辛伐他汀加药前后对TMEM16A钙激活氯电流的抑制情况进行统计分析,抑制率数据用Hill函数拟合,得到IC50值为4.75±0.55μM。辛伐他汀浓度为10μM和50μM时,TMEM16A电流的抑制率分别约为:80.0%和90.4%;对TMEM16B电流的抑制率分别为:14.1%和25.2%。TMEM16A的双突变和三突变体R429A/K430L、R429A/N435G、K430L/N435G和R429A/K430L/N435G都进一步降低了10μM辛伐他汀对TMEM16A钙激活氯电流的抑制率,分别为:32.6%、42.0%、38.7%和21.4%,相较于双突变体,辛伐他汀对TMEM16A三突变体的抑制率进一步降低,说明三个位点协同介导辛伐他汀与TMEM16A蛋白的结合作用。与WT TMEM16B相比,10μM辛伐他汀对TMEM16B-L372K/F379R突变体电流的抑制率显著升高（抑制率分别为14.2%和41.4%,p＜0.05）,进一步说明这几个突变体是介导辛伐他汀与Ca CC蛋白结合的关键位点。2.膜片钳结果显示,10μM辛伐他汀、洛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、瑞舒伐他汀和普伐他汀对TMEM16A电流的抑制率分别约为:80.0%、68.4%、48.5%、50.0%、25.7%和25.9%。分类统计亲脂性他汀（辛伐他汀、洛伐他汀、阿托伐他汀和氟伐他汀）和亲水性他汀（瑞舒伐他汀和普伐他汀）对TMEM16A电流的抑制率分别为63.6%和25.8%。CCK-8结果显示,经10μM的辛伐他汀、洛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀、瑞舒伐他汀和普伐他汀处理T47D细胞48h后,细胞的存活率分别为:36.1%、40.4%、67.8%、71.4%、68.1%和93.4%。按亲脂性亲水性他汀分类统计,细胞存活率分别为:53.9%和80.7%3.Meta分析结果显示,应用他汀药物治疗组的乳腺癌患者的特异性死亡率（HR:0.86,CI:0.80-0.93,p＜0.0001）和全因死亡率（HR:0.84,CI:0.78-0.91,p＜0.0001）较未使用他汀组明显减少,结果有显著统计学差异。亲脂性他汀显著降低乳腺癌特异性死亡率（HR:0.92,CI:0.88-0.96,p＜0.0001）和全因死亡率（HR:0.92,CI:0.90-0.94,p＜0.0001）,而亲水性他汀能降低特异性死亡率（HR:0.94,CI:0.90-1.00,P=0.036）,但对全因死亡率（HR:0.93,CI:0.83-1.04,P=0.205）没有作用。结论:辛伐他汀可抑制TMEM16A电流,R429、K430和R437是辛伐他汀抑制TMEM16A的关键氨基酸。亲脂性他汀尤其是含内酯环结构的他汀对TMEM16A电流的抑制效果好于亲水性他汀。亲脂性他汀对乳腺癌细胞增殖的抑制作用强于亲水性他汀。他汀类药物会显著性降低乳腺癌特异性死亡率和全因死亡率,亲脂性他汀比亲水性他汀抑制更显著,本研究结果提示,他汀类药物可能通过抑制TMEM16A钙激活氯通道介导对乳腺癌的抑制作用,从而降低乳腺癌的死亡率。