研究目的:　　尽管在包括肺癌在内的大多数癌症中，缺氧条件导致的糖酵解代谢途径的依赖已经广泛应用到临床中。但是缺氧反应的核心因子HIF-1的调控机制仍然不完全明确。本研究基于非小细胞肺癌相关的miRNA和缺氧反应之间的关联，研究miRNA对HIF-1的调控效应与缺氧反应的关系，进而探索其在临床中潜在的应用价值。　　研究方法:　　1.相关miRNA与临床表征相关性的研究　　收集具有完整随访资料的非小细胞肺癌患者的组织石蜡标本及部分癌旁组织，通过免疫组化法检测HIF-1和相关的调控分子VEGF在非小细胞肺癌组织中的表达情况。通过real-timePCR法检测新鲜组织中相关miRNA的含量，从中了解相互联系以及和临床表征中的关联。　　2.相关miRNA调控非小细胞肺癌细胞增殖能力的细胞机制研究　　从收集到的不同病理组织中分离细胞在体外进行原代培养。在缺氧环境下刺激细胞后，利用CFSE标记方式对增殖过程中的扩增的DNA进行荧光标记，观察不同病理组织增殖能力的差异;利用相关信号通路的特异性抑制剂对HIF-1上下游的关键性信号分子进行药理学干预，观察miRNA对非小细胞肺癌细胞生物学活动调控的影响，探索miRNA的调控的细胞机制。　　3.相关miRNA调控非小细胞肺癌细胞增殖能力的分子机制研究　　利用分子生物学手段，将miRNA转染入细胞系中，人工影响相关miRNA的含量，然后利用WesternBlot的方法分析药理干预后HIF-1信号通路上下游信号分子激活水平的变化，初步理清相关miRNA在HIF-1通路中的位置。　　研究结果:　　与非小细胞肺癌相关的miRNA与HIF-1蛋白表达水平做比较之后发现，miR-199a-5p与HIF-1在非小细胞肺癌病人组织中的表达成负面相关，并且此miRNA和临床的肺癌侵犯特征也成负面相关。同时，此miRNA和HIF-1的直接靶蛋白VEGF的表达也有相关性。初步证实了一个新的miRNA与临床表征的关联性。在体外实验中，miR-199a-5p的表达量高低和癌细胞在缺氧条件下的增殖能力有关联，证明了miR-199a-5p确实是通过调节癌细胞的生物学特性影响临床表征。使用HIF-1抑制剂和糖酵解抑制剂有效地阻断了miR-199a-5p对癌细胞增殖能力的调节，说明HIF-1和糖酵解通路是必要的。而mTOR抑制却对miR-199a-5p的调节作用不敏感。说明mTOR可能不是主要的调节通路。在细胞系的研究中，miR-199a-5p对HIF-1的调节不能影响上游的AKT的磷酸化但是可以导致HIF-1下游糖酵解相关酶的表达。提供了证据表明miR-199a-5p是位于AKT磷酸化和HIF-1蛋白稳定表达之间的事件。　　结论:　　从非小细胞肺癌中首次发现可以关闭缺氧反应主要因子HIF-1蛋白表达的小RNA(miR-199a-5p)，并初步证实了和临床表征的关系。miR-199a-5p的影响是通过调节癌细胞的增殖能力，而且需要通过HIF-1和糖酵解的通路。目前的证据表明miR-199a-5p是位于AKT磷酸化和HIF-1蛋白稳定表达之间的位置。