骨髓间充质干细胞对兔肝脏缺血再灌注损伤定向促修复作用的研究

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目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对家兔肝脏缺血再灌注损伤的修复作用,并与缺血预处理(Ischemia preconditioning,IP)的作用效果比较,并讨论其机制。方法取健康4周龄新西兰大白兔1只,取其骨髓间充质干细胞悬液,并应用全骨髓培养法培养扩增至第三代,部分细胞用流式细胞仪分析BMSCs表面CD29,CD44,CD45抗原的表达,余细胞用于移植。取健康成年新西兰大白兔32只随机分为A组缺血再灌注组,B组缺血再灌注加骨髓间充质干细胞移植组,C组缺血再灌注预处理组,D组为假手术组。A组经兔上腹部正中切口,暴露肝门,用无损伤动脉夹钳闭肝门,完全阻断肝血流30min后除去动脉夹实施再灌注,再灌注30min。B组缺血再灌注后颈内静脉缓缓注入1x106/mlBMSC悬液0.5ml余同A组。C组,阻断肝门使肝脏缺血5min,然后开放血流5min,反复3次,余同A组。D组只手术而不钳闭肝门。手术完毕,关腹,饲养一周后处死,颈内静脉取血3-4ml,放置10min,3000rpm/min离心取上清液,置于-20℃冰箱待检。取肝组织。将修整好的肝组织小块固定包埋切片,制备防脱切片,TUNEL法检测肝细胞凋亡情况。结果分离培养的BMSCs形态学特点明显,生物学特征如稳定性较好,镜下观察匀质性较好,且纯度较高。 A、B、C组血清AST、LDH及凋亡指数(AI)较D组高,且肝脏组织SOD水平较A组低,肝脏组织病理学损害重于D组;B、C组血清AST、LDH及凋亡指数(AI)较A组低,B组最低,且肝脏组织SOD水平较A组高,B组最高,肝组织病理学损害明显轻于A组,B组最轻,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论经颈静脉BMSCS移植,对新西兰大白兔肝脏缺血再灌注损伤有修复作用,且作用优于预处理。
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