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检测不同分化程度的大肠癌新鲜组织标本中RAB5A基因的表达情况;应用FAM标记的RAB5A反义寡核苷酸,体外转染高转移度的大肠癌细胞,观察肿瘤细胞的转移相关指标的变化,以初步探讨RAB5A在大肠癌转移中的作用与机制。
方法一、Trizol法提取大肠癌新鲜组织总RNA、逆转录合成cDNA第一链,应用实时荧光定量PCR法检测其RAB5A的表达量,分析RAB5A基因表达与大肠癌转移程度的相关性。
二、用脂质体将RAB5A反义寡核苷酸转染人大肠癌高转移细胞LS174T,同时用transwell小室法检测其对细胞的侵袭和运动能力的影响。
结果:一、大肠癌组织中,RAB5AmRNA表达阳性率达100%(60/60),高低分化程度不同者RAB5A表达程度差异有显著性(P<0.01),随着大肠癌分化程度的降低,表达明显增高。
二、RAB5A反义寡核苷酸转染后48h,transwell小室结果可见转染后大肠癌细胞LS174T的侵袭和运动能力明显低于对照组(P<0.01)。
结论RAB5A基因与大肠癌分化程度呈负相关,RAB5A在其中起调节作用,是与大肠癌的分化程度密切相关的指标之一。RAB5A的反义分子能够有效地阻断该基因表达的翻译过程,在细胞内发挥预期作用。