论文部分内容阅读
细菌性疾病是引起水产养殖生物大量死亡的主要原因之一,严重危害水产养殖业的可持续发展。银纳米粒子（AgNPs）具有杀菌作用强、广谱杀菌且不产生耐药性等特点受到广泛关注,可为解决水产养殖中的细菌性病害提供新思路。福建省是鲍鱼养殖大省,加工过程产生的鲍脏器大部分被直接丢弃,不仅造成资源的浪费,也会污染环境。本研究采用从鲍鱼内脏提取的糖蛋白作为还原剂和稳定剂制备鲍内脏糖蛋白纳米银溶胶（Avg-AgNPs）,探究合成的最适条件,并对其表征、抗菌性能、细胞毒性和稳定性进行研究,既符合绿色制备纳米粒子的发展趋势,也有助于鲍鱼内脏的充分利用,为AgNPs在水产养殖业的应用提供理论基础。本文主要研究内容和结果如下:（1）对不同反应浓度及反应时间对Avg-AgNPs合成的影响进行了研究,结果表明:当鲍内脏糖蛋白浓度为0.5 mg/mL、硝酸银浓度为3.25 mM、反应240 min时合成的Avg-AgNPs效果最佳。对最佳条件合成的Avg-AgNPs进行表征分析,结果发现合成的纳米粒子不仅含有AgNPs,还有AgCl晶体;AgNPs表面包覆了一层鲍内脏糖蛋白,体系中含有氯元素;纳米粒子的形貌近似球形和三角形,粒径范围为5-25 nm。（2）为了去除体系中的AgCl晶体,本文探究了3种不同条件制备Avg-AgNPs的效果。结果发现优化后的鲍内脏糖蛋白制备的Avg-AgNPs含量最高;离心作用和优化后的糖蛋白制备的纳米粒子只检测到AgNPs,无AgCl晶体;不调pH制备的溶胶依然含有AgCl晶体。综合考虑,0.5 mg/m L优化后的鲍内脏糖蛋白与1.625 mM硝酸银制备的AgNPs效果最佳。表征分析结果表明,AgNPs的形貌为球形,主要尺寸在5-15 nm之间,分散性好。鲍内脏糖蛋白中的-OH、-NH2、-COO-和糖苷键等与AgNPs的还原和稳定过程有关。（3）采用最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）法研究Avg-AgNPs对南美白对虾4种常见的致病弧菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抗菌性能。结果表明,Avg-AgNPs对6种受试菌株均有良好的抗菌活性。采用抑菌圈法与中药的抗菌性能进行对比发现,Avg-AgNPs抑菌效果比中药稳定,具有广谱抑菌效果。（4）本文采用MTT法、细胞形态观察和氧化损伤检测法研究了Avg-AgNPs的细胞毒性。结果表明,Avg-AgNPs浓度在50μg/m L以上时具有细胞毒性,可导致LO2细胞的存活率下降,细胞形态改变,细胞内SOD、GSH-Px和LDH活性下降,MDA含量升高,细胞氧化应激;浓度在25μg/mL以下时,对细胞存活率及形态无影响,细胞未发现明显氧化应激反应,无明显细胞毒性。（5）Avg-AgNPs的稳定性结果表明,经4℃、18℃、25℃、32℃、高温灭菌和巴氏杀菌处理后的Avg-AgNPs分散稳定性良好,没有明显聚集现象;在分散介质pH为4、7.5、9.5、11条件下稳定性良好;Avg-AgNPs在海水中分散不稳定,容易聚集。