论文部分内容阅读
目的:STIL蛋白在中心体复制过程中起到重要调控作用。在细胞有丝分裂过程中,过多或过少的STIL均会造成中心体数目异常,导致非正常细胞分裂。在细胞生长、增殖中的重要作用,促使我们推测STIL可能在肿瘤发生中起作用。大量研究表明STIL在多种癌症组织中呈高表达,而其在膀胱癌的作用目前尚不明确。我们通过生物信息学和实验验证STIL与膀胱癌发生、发展的相关性,明确STIL在膀胱癌中的生物学效应,探究STIL影响膀胱癌的作用机制及可能存在的相关途径,深入了解STIL在膀胱癌中的功能作用及其机制。方法:通过生物信息学检索分析STIL与膀胱癌的相关性及其在膀胱癌组织中的表达情况。体外培养膀胱癌EJ细胞系,使用STIL的特异性si RNA转染细胞,抑制STIL表达,通过细胞划痕实验、Transwell实验,验证抑制STIL表达后的膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的变化;通过Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白,验证抑制STIL表达后的膀胱癌细胞凋亡改变。提取细胞RNA及总蛋白,通过RT-q PCR和Western Blot方法检测EMT相关分子标志物的表达情况,验证抑制STIL表达后对膀胱癌细胞EMT的影响。为了进一步探究STIL的作用机制,通过生物信息学检测,发现了YY1与STIL表达呈正相关,并且同样在膀胱癌中高表达。我们在使用STIL的si RNA及过表达质粒处理细胞后,通过Western Blot方法检测YY1表达水平变化,相对应的使用YY1的特异性si RNA处理细胞后检测STIL表达水平变化,以此来验证YY1与STIL的相关性及作用关系。结果:生物信息学分析结果显示,STIL在膀胱癌组织中高表达。在使用STIL的si RNA转染细胞,抑制STIL表达后,抑制了细胞凋亡,细胞的侵袭、迁移能力降低。提取细胞RNA及总蛋白,通过RT-q PCR和Western Blot方法检测EMT相关分子标志物的表达情况,共同验证了E-cadherin的表达升高,N-cadherin、Vimentin及Zeb-1的表达降低。与正常膀胱组织相比,YY1在非肌层浸润性膀胱癌及肌层浸润性膀胱癌中高表达,STIL的m RNA表达水平呈现相同趋势。YY1在膀胱癌中的表达水平与STIL的呈正相关。抑制或是过表达STIL后,YY1蛋白的表达并未发生改变。而抑制YY1表达后,STIL蛋白表达降低。结论:1、STIL在膀胱癌中高表达。2、STIL促进膀胱癌的EMT进程。3、YY1作为一种癌基因在膀胱癌中高表达,调控STIL促进膀胱癌EMT的发生。