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近来，广西一些养殖场频繁发生以母猪流产、死胎、木乃伊、仔猪呼吸道症状等为特征的流行性传染病，怀疑为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）所致。本研究应用针对PRRSV的N基因的特异性引物P1／P2，通过RT-PCR技术对从广西南宁市郊区收集的仔猪病料进行检测，结果为阳性。将材料接种于易感细胞—Marc-145细胞，经过6代盲传，结果出现了典型的细胞病理变化（CPE），与对照株病变相似，经鉴定为PRRSV，成功地分离出广西第一株PRRSV毒株，命名为GXA株，其毒价为105.33TCID50／ml。 参考VR-2332和OH-1a株基因序列，设计了3对引物E1／E2、M1／M2、N1／N2，分别扩增GXA株的E、M、N基因。并进行克隆和测序。结果分别扩增出大小为668bp、582bp和443bp的目的片段。应用DNAstar生物学软件对所测得的序列进行处理后，得到GXA株的E、M和N基因ORF全长分别为603nt、524nt和372nt，分别编码200、174和123个氨基酸。将此3个基因序列分别与国内外已发表的ATCC VR-2332、MLV、BJ-4和LV等13个毒株相应基因序列进行了同源性比较。结果发现GXA株与美洲型毒株E基因的核苷酸及其推定的氨基酸的同源性分别为88.7-99.7％和93.8-100％，与欧洲型代表株—LV株的核苷酸及其推定的氨基酸的同源性分别为64.7％和66.3％；GXA株与美洲型毒株M基因的核苷酸及其推定的氨基酸的同源性分别为94.5-100％和96.6-100％，与LV株的核苷酸及其推定的氨基酸的同源性分别为69.2％和78.9％；GXA株与美洲型毒株N基因的核广西大学2004届硕士毕业论文昔酸及其推定的氨基酸的同源性分别为93.8一1 00%和95.2一1 00%，与LV株的核昔酸及其推定的氨基酸的同源性分别为66.3%和63.9%。同源性分析显示，GxA株与VR一2332、劫LV和BJ一4的同源性非常高，而GXA与LV同源性非常低。构建的系统发育树分析，GXA与VR一2332、MLV及BJ一4株亲缘关系比较密切。从而表明GXA株属于美洲型毒株，可能来源于疫苗株。 将GXA株的E、M、N基因从重组质粒 pMD一E、pMD一M、pMD一N中亚克隆至原核表达载体PE丁一32a上，构建了原核表达重组质粒PE丁一E、pE丁一M和PE丁喇，并通过酶切鉴定，证实构建成功。