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目的:构建噬菌体Phi29马达RNA与靶向survivin核酶及siRNA的嵌合体,研究其沉默survivin基因的表达及其诱导肿瘤细胞凋亡的效应。方法:构建pRNA/Ribozyme(survivin)和pRNA/siRNA(survivin)嵌合体,应用脂质体转染技术,将其转染入人肿瘤细胞株MCF-7和Hela细胞。采用real-time PCR方法检测转染细胞与对照细胞内survivin基因mRNA的表达水平,通过倒置显微镜、倒置荧光显微镜以及Annexin-V/PI双染后流式细胞术(FCM)检测实验组与对照组肿瘤细胞凋亡率。结果:体外细胞模型研究结果表明:①转染pRNA/Ribozyme(survivin)嵌合体的人乳腺癌细胞株MCF-7与转染突变体pRNA/Ribozyme(mutant)以及未转染对照组比较,转染pRNA/Ribozyme(survivin)嵌合体的人肿瘤细胞株survivin mRNA表达水平显著降低,转染突变体pRNA/Ribozyme(mutant)与未转染对照组比较无显著差异;②转染pRNA/Ribozyme(survivin)和pRNA/siRNA (survivin)嵌合体后,细胞凋亡率明显增高;③通过共转染GFP表达质粒和pRNA/siRNA(GFP)后,采用倒置荧光显微镜和FCM检测结果表明,pRNA/siRNA(GFP)可显著沉默GFP的表达,而pRNA/siRNA(survivin)嵌合体对GFP的表达无抑制作用,表明pRNA/siRNA(survivin)嵌合体的作用具有高度特异性。结论: pRNA/Ribozyme(survivin)和pRNA/siRNA(survivin)嵌合体能够特异性沉默肿瘤细胞中survivin基因的表达,增加肿瘤细胞的凋亡率,有抗瘤效应,表明pRNA可作为小分子治疗物质的有效载体。