第一部分MALAT1在膀胱癌中的表达及功能的研究[实验目的]：目前,已有多个实验证实lncRNAMALAT1在多种肿瘤中呈高表达,影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移等行为。本实验的目的在于研究MALAT1在膀胱尿路上皮癌中的表达情况及其对膀胱癌细胞功能的影响。[实验方法]：收集45对膀胱尿路上皮癌及邻近正常膀胱组织标本；通过实时定量PCR检测45对标本的MALAT1表达水平；体外培养膀胱癌EJ及5637细胞系；以MALAT1siRNA(si-MALAT1)和阴性对照(si-NC)转染EJ及5637细胞干扰MALAT1表达；MTT比色法检测细胞增殖活力；流式细胞术定量检测细胞凋亡和细胞周期。[实验结果]：相对于正常尿路上皮组织,MALAT1在膀胱尿路上皮癌组织中呈高表达。且在高级别尿路上皮癌中呈高表达的比例和表达水平高于低级别尿路上皮癌(P=0.0109)；在肌层浸润性尿路上皮癌中呈高表达的比例和表达水平高于非肌层浸润性尿路上皮癌(P=0.0258)；在有转移的膀胱癌中呈高表达的比例和表达水平高于未转移的膀胱癌(P=0.032)。在si-MALAT1转染后,EJ和5637细胞均出现了增殖抑制,凋亡增加,G0/G1期阻滞的现象。[实验结论]：lncRNA MALAT1在膀胱尿路上皮癌中呈高表达,且与肿瘤的组织学分级、临床分期及肿瘤转移密切相关。lncRNA MALAT1在膀胱癌细胞中具有促进细胞增殖,抑制凋亡,促进细胞周期进展的促癌作用。第二部分MALAT1在膀胱癌中促癌作用的机制研究[实验目的]：EZH2在多个实验中被证实是重要的促癌基因,与膀胱癌密切相关,具有多个与肿瘤相关的下游基因。本实验旨在研究EZH2在膀胱癌组织中的表达情况,以及MALAT1与EZH2之间的作用及其机制。[实验方法]：收集45对膀胱尿路上皮癌及邻近正常膀胱组织标本；通过实时定量PCR检测45对标本的EZH2表达水平;体外培养膀胱癌EJ及5637细胞系；RIP实验检测MALAT1是否与EZH2蛋白结合；以siRNA转染EJ及5637细胞干扰MALAT1表达；实时定量PCR检测Bcl2、c-myc mRNA的表达；Western blot检测EZH2、Bcl2、c-myc蛋白的表达。[实验结果]：相对于正常膀胱组织,EZH2在膀胱癌组织中呈高表达。且在高级别尿路上皮癌中呈高表达的比例和表达水平高于低级别尿路上皮癌(P=0.0182);在肌层浸润性尿路上皮癌中呈高表达的比例和表达水平高于非肌层浸润性尿路上皮癌(P=0.0206)。在膀胱癌组织中,EZH2与MALAT1的表达水平呈正相关(r=0.5242,P=0.0002)。lncRNA MALAT1与EZH2蛋白直接结合。在si-MALAT1转染后,EJ和5637细胞中EZH2, Bcl2, c-myc蛋白表达下调,Bc12与c-myc的mRNA表达下调。[实验结论]：EZH2在膀胱癌中呈高表达,且与肿瘤的组织学分级、临床分期密切相关。在膀胱癌中EZH2和MALAT1的表达水平呈正相关。MALAT1通过结合EZH2蛋白调控其下游基因,产生促癌作用。第三部分miR-101在膀胱癌中抑制MALAT1表达及作用的研究[实验目的]：miR-101已被证实在多种肿瘤中出现表达下调,并发挥抑癌作用。miR-101在膀胱癌中对EZH2有调控作用。本实验旨在研究miR-101与MALAT1在膀胱癌中是否存在调控关系及其作用。[实验方法]：收集45对膀胱尿路上皮癌及邻近正常膀胱组织标本；通过实时定量PCR检测45对标本的miR-101表达水平；体外培养膀胱癌EJ及5637细胞系；构建miR-101过表达质粒。以anti-miR-101及过表达质粒转染EJ及5637细胞,使miR-101表达下调或过表达：实时定量PCR检测MALAT1表达。MTT比色法检测细胞增殖活力；Western blot检测EZH2蛋白的表达。[实验结果]：相对于正常膀胱组织,miR-101在尿路上皮癌组织中表达下调,且miR-101与MALAT1的表达水平呈负相关(r=-0.5335,P=0.0002)。在转染anti-miR-101后,EJ及5637细胞中MALAT1表达上调,转染pPG-miR-101过表达质粒后,EJ和5637细胞中MALAT1表达下调。miR-101表达下调促进EJ细胞和5637细胞增殖,同时干扰MALAT1则能抑制这一趋势。miR-101表达下调促进EZH2蛋白表达上调,同时干扰MALAT1则能抑制这一趋势。[实验结论]：miR-101在膀胱癌中呈低表达,其表达水平与MALAT-1的表达水平呈负相关。在膀胱癌细胞中,miR-101能调控MALAT1的表达水平。miR-101通过抑制MALAT1来抑制细胞增殖。MALAT1能部分解除miR-101对EZH2的抑制。MALAT1可能是miR-101的一个靶基因。