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氧化应激是动物机体内氧化还原系统失衡的状态,是导致人类和动物综合病症的主要原因之一。敌草快(Diquat)为氧化还原型双吡啶除草剂,属中等毒性化合物。 Diquat进入动物体内后,利用分子氧产生氧自由基和其它活性氧(reactive oxygen species,ROS),导致氧化应激。硫辛酸(lipoic acid,LA)作为一种高效的抗氧化剂可以减少ROS的产生,减弱DNA的氧化损伤,抑制脂质过氧化,并能很大程度地改善体内抗氧化防御系统,对氧化应激引起的疾病有显著的缓解作用。本文研究LA对Diquat引起的氧化应激状态下育肥猪生长性能、血浆和肠道氧化还原状态、肠道细胞凋亡、肠道损伤及消化功能的调控作用。选取24头(70.64±3.61 kg)的健康大白阉公猪,按照2×2因子设计,随机分为对照、LA、Diquat、LA+Diquat四组,每个组设6个重复,试验期29 d。LA添加剂量为800 mg/kg饲粮,饲喂贯穿试验全程,而一次性腹腔滴注 Diquat于试验第15 d进行,无腹腔滴注 Diquat试猪滴注等量的生理盐水。于试验第29 d对所有试猪前腔静脉采血后电击晕悬挂屠宰取样。 (1)运用试剂盒检测血浆和肠道的抗氧化酶类指标,Western blotting检测热休克蛋白70(HSP70)和凋亡标志性蛋白Caspase-3的表达量。 试验结果表明Diquat极显著降低了试猪生产性能、血浆与肠道抗氧化能力(P<0.01),极显著升高了肠道HSP70和Caspase-3表达量(P<0.01);饲粮中添加LA使ADFI显著增加(P<0.05)、ADG极显著升高(P<0.01),使育肥猪肠道MnSOD极显著升高(P<0.01),对血浆和肠道其它抗氧化指标的影响均差异不显著(P>0.05),使育肥猪肠道HSP70表达量显著降低(P<0.05),Caspase-3表达量有降低的趋势(P=0.052);在应激状态下,饲粮中添加 LA使 ADFI和ADG极显著增加(P<0.01),使育肥猪血浆SOD显著升高(P<0.05),使育肥猪肠道SOD、MnSOD极显著升高(P<0.01)。 (2)运用试剂盒检测血浆和肠道氧化损伤标志物的含量以及空肠食糜消化酶的活性,苏木精-伊红(HE)染色后运用图像分析软件观察肠道形态结构并测定绒毛高度、隐窝深度,并计算绒毛高度/隐窝深度(V/C)比值,荧光定量PCR法检测闭合蛋白(Occludin)和紧密结合蛋白(zonula occludens protein-1,ZO-1)转录水平的相对表达量。 试验结果表明:Diquat极显著升高了试猪血浆和肠道丙二醛(MDA)、蛋白质羰基(PCO)和8-羟基鸟苷(8-OHdG)的含量(P<0.01),极显著降低了十二指肠、空肠及回肠绒毛高度、隐窝深度(P<0.01),极显著增大了十二指肠和空肠 V/ C(P<0.01),显著增大了回肠 V/ C(P<0.05),极显著降低了空肠Occludin和ZO-1 mRNA相对表达丰度(P<0.01),极显著降低了空肠食糜中淀粉酶、胰蛋白酶以及脂肪酶的活性(P<0.01);饲粮中添加 LA对试猪血浆和肠道 MDA、 PCO和8-OHdG含量的影响均差异不显著,对十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度、隐窝深度以及 V/ C的影响均差异不显著,对空肠 Occludin和ZO-1 mRNA相对表达丰度也无差异性影响,对空肠食糜中淀粉酶、胰蛋白酶以及脂肪酶活性的影响差异也均无显著性;在应激状态下,饲粮中添加 LA使育肥猪血浆8-OHdG含量显著降低(P<0.05),使育肥猪十二指肠绒毛高度、空肠绒毛高度以及回肠隐窝深度显著升高(P<0.05),空肠V/C显著降低(P<0.05),回肠V/C极显著降低(P<0.01),使育肥猪空肠 Occludin和 ZO-1 mRNA相对表达丰度显著升高(P<0.05),使空肠食糜淀粉酶和胰蛋白酶的活性显著提升(P<0.05)。 结论:Diquat导致了育肥猪严重的氧化应激,并降低了育肥猪的生长性能,造成了育肥猪肠道的细胞凋亡和肠道形态结构的严重损伤并导致育肥猪消化功能的减弱,而饲粮中添加800 mg/kg LA缓解了氧化应激,并在氧化应激状态下一定程度地提高了育肥猪的生长性能、改善了机体的氧化还原状态;缓解了氧化应激状态下育肥猪肠道的细胞凋亡;修复了氧化应激下育肥猪肠道的损伤;提高了氧化应激状态下育肥猪的消化功能。