【摘 要】
：
目的:本文旨在探索杀伤细胞凝集素样受体1（The killer cell lectin-like receptor G1,KLRG1）对巨噬细胞免疫功能的调控机制,以期为临床通过干预巨噬细胞免疫功能治疗肿瘤提供新的免疫靶点。方法:（1）采用流式细胞术（Flow cytometry,FCS）和实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time fluorescence quantitative polym
论文部分内容阅读
目的:本文旨在探索杀伤细胞凝集素样受体1（The killer cell lectin-like receptor G1,KLRG1）对巨噬细胞免疫功能的调控机制,以期为临床通过干预巨噬细胞免疫功能治疗肿瘤提供新的免疫靶点。方法:（1）采用流式细胞术（Flow cytometry,FCS）和实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR）分析肺腺癌患者和正常体检对照组外周血中单核巨噬细胞数量变化与极化情况;（2）采用免疫组化染色（Immunohistochemistry,IHC）、蛋白免疫印迹（Western blot,WB）和 FCS分析体外细胞系RAW264.7（小鼠单核巨噬白血病细胞）与肿瘤来源的巨噬细胞中KLRG1的表达;（3）采用FCS分析体外细胞系RAW264.7在LPS刺激后KLRG1的表达;（4）采用慢病毒技术敲低RAW264.7中KLRG1,酶联免疫吸附（Enzyme immunosorbent assay,ELISA）与 qRT-PCR 检测白细胞介素-12（Interleukin-12,IL-12）与白细胞介素-18（Interleukin-18,IL-18）表达情况;（5）将敲低KLRG1的巨噬细胞同CD3+T细胞共培养,FCS分析CD4+T-bet+T细胞（Th1）比例,ELISA检测其效应分子 γ-干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）的分泌水平;（6）采用 FCS、Western blot、qRT-PCR分析敲低KLRG1后巨噬细胞极化方向及其相关效应分子的变化;（7）将敲低KLRG1的巨噬细胞同肺腺癌细胞共培养,FCS分析肺腺癌细胞的增殖情况;（8）将敲低KLRG1的巨噬细胞与肺腺癌细胞混合皮下注射构建小鼠皮下瘤模型,采用FCS、ELISA、qRT-PCR分析敲低KLRG1后对小鼠肿瘤生长的影响;（9）采用Mn2+刺激RAW264.7 与骨髓来源的巨噬细胞（Bone marrow derived Macrophage,BMDM）,FCS、ELISA、qRT-PCR分析巨噬细胞极化方向以及相关效应分子的变化;（10）构建小鼠皮下瘤模型,采用FCS、ELISA、qRT-PCR分析Mn2+治疗后对小鼠肿瘤来源巨噬细胞免疫功能调控以及肿瘤生长的影响。结果:（1）肺腺癌病人外周血中M1型单核巨噬细胞数量下调,M2型单核巨噬细胞上调,单核巨噬细胞趋化为M2型;（2）肺腺癌组织中,髓系细胞KLRG1表达量下调,荷瘤小鼠肿瘤相关巨噬细胞KLRG1的表达量也明显下调,另外在鼠源性细胞系RAW264.7中,KLRG1也存在表达;（3）LPS刺激后巨噬细胞KLRG1表达明显上调;（4）敲低巨噬细胞KLRG1后诱导IL-12、IL-18下调;（5）敲低巨噬细胞KLRG1后诱导Th1细胞极化受损,Th1效应分子IFN-γ分泌量明显降低;（6）敲低KLRG1后M1型细胞因子表达降低,M1功能受到抑制;（7）敲低KLRG1后巨噬细胞对肿瘤细胞吞噬杀伤作用减弱,肿瘤细胞增殖明显;（8）敲低KLRG1组小鼠肿瘤较对照组体积明显增加,肿瘤组织中浸润的CD4+T与CD8+T较对照组明显降低,IFN-y、TNF-α分泌量也下调;（9）Mn2+刺激RAW264.7与BMDM后,KLRG1的表达量上调,CD86也明显上调,但CD206变化不大,同时M1型细胞因子mRNA水平明显上调,M2型细胞因子mRNA水平变化不大;（10）给予Mn2+治疗后的荷瘤小鼠,肿瘤体积明显缩小,肿瘤组织中浸润的KLRG1+M细胞比例明显增加,CD4+T与CD8+T细胞比例也明显增加。结论:本文证实巨噬细胞中KLRG1的表达上调可促进M1型巨噬细胞功能增强,并通过上调的IL-12增强了下游T细胞的抗肿瘤免疫应答。同时,Mn2+亦可通过诱导巨噬细胞KLRG1的表达增强抗肿瘤免疫应答,为肿瘤治疗提供了新的理论基础和实验依据。
其他文献
目的:人类ABO血型系统的分子生物学检测技术弥补了血清学定型技术在疑难血型、疑难配血、新生儿溶血病（Hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN）的产前诊断等诸多方面的限制。本研究旨在利用二维聚合酶链反应（Two-dimensional polymerase chain reaction,2D PCR）技术快速鉴定单核苷酸多态性（Single nu
目的:探讨内皮特异性分子-1（Endothelial specific molecule-1,Endocan）、纤维蛋白原（Fibrinogen,Fib）对慢性阻塞性肺疾病急性加重期（Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD）的诊断、评估病情及预后的指导意义。方法:本研究为单中心、前瞻性研究,收集2021年
目的糖皮质激素性骨质疏松症（Glucocorticoid induced osteoporosis,GIOP）是一种代谢性疾病,主要由内源性或者是外源性糖皮质激素所引起的,它的特征主要是骨强度下降、骨折风险性增强等,骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）是骨形成的关键细胞,m6A可以调节BMSCs成脂分化与成骨分化之间的转换,甲基转移酶介导的m6A动
目的:胰腺癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,但因其恶性程度较高且易产生化疗耐药,预后极差。目前对于胰腺癌的治疗处于瓶颈期,亟待探索胰腺癌化疗耐受的可能机制。作为一种微小RNA,有研究表明miR-613在多种恶性肿瘤中存在异常表达并与其发生发展密切相关,但miR-613与胰腺癌细胞吉西他滨的耐受性还没有相关的研究。鉴于此,拟体外研究miR-613在耐吉西他滨胰腺癌细胞株的表达情况以探讨胰腺癌细胞耐药的可
目的:胰腺癌的恶性程度极高,因为它发病隐匿、进展快,胰腺癌患者在诊断明确时,已经处于较晚期,故胰腺癌预后极差。据先前研究发现,ARF6（ADP核糖基化因子6）与MAPK/ERK通路存在相互激活的关系。通过探索ARF6的下游分子,寻找并证明ARF6调控MAPK/ERK通路的分子及机制。进而探索该分子（即DUSP6）对胰腺癌细胞的体外增殖、凋亡等能力的影响。方法:通过对差异表达ARF6的胰腺癌细胞进行
目的:1.探讨弥漫大B细胞淋巴瘤,非特指型（Diffuse large B-cell lymphoma,not oth-erwise specified,DLBCL,NOS）的病理诊断进展。2.探讨DLBCL,NOS中热点基因与临床病理特征的相关性。3.探讨DLBCL,NOS中热点基因与生存预后的相关性。方法:1.选取2016年到2020年苏州大学附属第三医院98例大B细胞淋巴瘤,根据镜下形态、免
目的:分析本地区剖宫产次数、子宫位置与剖宫产术后子宫瘢痕憩室（Cesarean Scar Diverticulum,CSD）的关系,评估子宫位置、憩室相关径线及憩室面积与CSD患者经期延长天数之间的相关性。对比三种手术方式,即阴式手术联合宫腔镜电灼术、宫腔镜手术及阴式手术的治疗效果,分析三种手术各自的优势及局限性,为剖宫产术后子宫瘢痕憩室的手术治疗提供更好的选择。方法:随机选取2018年07月至2
目的:多中心回顾性分析抗合成酶综合征（Antisynthetase syndrome,ASS）合并间质性肺病（Intestinal Lung Disease,ILD）患者的临床特征、影像学改变、治疗及预后情况,探讨影响抗合成酶综合征相关间质性肺病（Antisynthetase syndrome related with interstitial lung disease,ASS-ILD）患者疾病进
2021年2月21日,我国第18个聚焦“三农”领域的一号文件出台,将“乡村振兴”工作提到前所未有的高度。民族要复兴,乡村必须要振兴,这是全党工作的重中之重,农村基层党员干部在推动乡村振兴工作中发挥着不可或缺的作用,他们作为我国乡村振兴政策落地“最后一公里”的执行者,一头扎根于群众一头联系着政府,一旦这群“掌权者”出现贪腐问题,不仅使得国家的政策无法实施和落地,更严重阻碍了国家富强、民族复兴的伟大进
第一部分FNDC5在亚临床型糖尿病心肌病中的诊断价值[目的]探讨Ⅲ型纤维蛋白结构域结合蛋白5（Fibronectin type Ⅲ-domain containing protein 5,FNDC5）对亚临床型糖尿病心肌病的诊断价值。[方法]本次研究的研究对象是2018年4月至2019年6月于苏州大学附属第三医院内分泌科入院的无心血管疾病症状的2型糖尿病患者。经过门控心肌灌注显像检查排除其它心血管