增塑剂邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)具有较强的生殖发育毒性和神经毒性,中国、美国等都将其列为优先污染物。LncRNA这种RNA分子在机制上能够与核酸和蛋白质相互作用,广泛参与各种生物学过程。通过查阅文献和数据库,发现lncRNA cyrano参与斑马鱼神经发育。为确定cyrano是否参与增塑剂DEHP对斑马鱼胚胎神经发育的影响以及作用机制,利用多个软件预测lncRNA cyrano的靶miRNA及其靶基因,构建了 lncRNA-miRNA-mRNA的调控网络,挑选其中一条cyrano-miR-7-znf503调控路线作为研究对象。斑马鱼胚胎暴露于7种不同浓度的DEHP后,mbp、neuroD、ascl1a、alpha1 tublin、和neurog等参与斑马鱼神经发育的基因表达改变,随着处理浓度的升高,cyrano的表达显著上调,miR-7的表达显著下调,而znf503的表达显著上调但不具有浓度依赖性。为确定生物信息学预测所得lncRNA cyrano是否通过调控miR-7及其靶基因znf503参与斑马鱼胚胎的发育,分别构建了 pRL-cyrano-WT/pRL-UTR-WT、pRL-cyrano-MUT/pRL-UTR-MUT 4种重组海肾荧光素酶载体,通过双荧光素报告基因实验发现cyrano与miR-7存在相互作用的位点,而znf503的3’-UTR上不存在miR-7的结合位点。向斑马鱼细胞系ZF4转染miR-7 mimics,发现cyrano和znf503在mRNA水平表达显著降低,以ZNF503多肽保守序列作为免疫原的重组抗体进行western blot分析,未检测到目的蛋白。在ZF4细胞中用siRNA干扰lncRNA cyrano的表达后,检测细胞增殖以及凋亡情况发现细胞增殖减少,细胞凋亡轻微增加。综上结果,cyrano在斑马鱼胚胎中促进细胞增殖,可能通过调节miR-7参与斑马鱼胚胎的神经发育,miR-7的靶基因有待进一步确定。