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对于雄性动物而言,睾丸发育直接影响其性成熟早晚及精液品质,从而决定雄性动物繁殖性能。精子发生起始于精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)的自我更新和分化,睾丸组织中SSCs分布反映了其组织发育程度,组织学分析可直接观察睾丸结构变化规律及生精细胞分布情况。lncRNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一类转录本长度在200 nt以上的非编码RNA,表达丰度较低,只在细胞发育、分化的特定阶段表达,具有明显的组织细胞表达特异性。lncRNA参与决定干细胞命运,包括维持自我更新和分化,但lncRNA调控SSCs增殖与分化的研究少有报道。为探索陕北白绒山羊不同发育期睾丸组织lncRNA表达差异,本试验取1月龄、3月龄、6月龄及成年陕北白绒山羊睾丸组织制作切片,进行苏木精-伊红染色,镜下观察曲细精管形态,统计各生殖细胞数,分析不同发育阶段陕北白绒山羊睾丸发育程度;同时进行免疫组织化学染色,并用q-PCR检测了发育阶段睾丸中SSCs标记基因(CD49f、PLZF、Thy1、ETV5、VASA、Oct4、Nanog、Nanos2、CyclinA)的相对表达量,以分析不同发育阶段陕北白绒山羊SSCs相对丰度;对1月龄、3月龄及成年羊睾丸组织进行lncRNA测序并分析lncRNA差异表达。本研究获得的主要研究结果如下:1.随着年龄的增长,绒山羊曲细精管直径显著增大(P<0.05),6月龄达到150.72μm,略低于成年羊(161.94μm)(P>0.05)。绒山羊细胞层数随年龄的增长而增长,6月龄达到7.70层,显著高于1月龄和3月龄(P<0.05)。3月龄陕北白绒山羊曲细精管中精原细胞最为丰富,占总细胞数的46.40%,明显高于1月龄(33.10%)、6月龄(9.10%)和成年羊(7.60%)(P<0.05)。曲细精管横截面细胞总数随年龄增长而增长,6月龄和成年绒山羊曲细精管横截面细胞总数显著高于1月龄和3月龄绒山羊(P<0.05)。结果表明,陕北白绒山羊在6月龄达到性成熟,3月龄睾丸中精原细胞最为丰富。2.精原干细胞标记因子CD49f、CD90、GFRa1及ETV5在3月龄绒山羊睾丸中阳性率较高,分别为41.67%、40.20%、21.92%、25.36%,且显著高于6月龄和成年羊(P<0.05);6月龄绒山羊睾丸中CD49f、CD90、GFRa1及ETV5阳性率比成年羊略高,但差异不显著(P>0.05)。PLZF在睾丸中阳性率随年龄增长而降低,差异显著(P<0.05)。精原干细胞标记基因(CD49f、PLZF、Thy1、ETV5、VASA、Oct4、Nanog、Nanos2)均在3月龄睾丸组织中高表达,其中PLZF、Thy1、ETV5、VASA、Nanog及Nanos2显著高于1月龄、6月龄及成年羊(P<0.05)。另外,CyclinA在6月龄羊睾丸中表达量最高,显著高于其他组(P<0.05)。结果表明,与1月龄、6月龄和成年羊相比,3月龄羊睾丸中SSCs浓度最高,是SSCs体外分离富集的理想材料。3.在绒山羊睾丸组织中,1月龄与3月龄差异表达lncRNA共17个,其中13个表达上调,4个表达下调。1月龄与成年羊差异表达lncRNA共247个,其中239个表达上调,8个表达下调。3月龄与成年羊差异表达lncRNA共201个,其中174个表达上调,27个表达下调。结果表明这些差异表达的lncRNA可能参与调控生精细胞发育。对这些差异表达的lncRNA进行分析,发现这些lncRNA通过各种途径发挥作用,为lncRNA对生精过程作用的研究奠定了基础。本研究表明,与1月龄、6月龄、成年陕北白绒山羊相比,3月龄羊睾丸中SSCs浓度最高,适合作为SSCs富集材料。在6月龄陕北白绒山羊睾丸中有大量精子细胞,已经达到性成熟。对1月龄、3月龄及成年羊睾丸组织进行lncRNA测序,发现有lncRNA差异表达,说明这些lncRNA可能参与生精细胞发育调控。