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目的：
1.检测CD2AP基因在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达情况，分析其与胃癌患者临床病理特征以及预后之间的关系。
2.探究CD2AP基因过表达和敲低对胃癌细胞体外生物学行为的影响。
3.探究CD2AP基因抑制胃癌细胞转移的机制。
方法：
1.收集564例胃癌患者的肿瘤组织标本及其中56例对应的癌旁正常组织标本，利用蛋白免疫印迹法（Western Blot）验证抗体特异性后，采用免疫组织化学染色法（Immunohistochemistry）检测胃癌和癌旁标本中CD2AP蛋白水平的表达差异情况。下载GEO数据库中的胃癌数据集，提取胃癌和癌旁CD2AP的mRNA表达情况。联系常见临床指标，病理分型以及患者预后生存情况，统计分析细胞骨架调节蛋白CD2AP与胃癌的相关关系。
2.构建表达CD2AP基因的质粒，设计并合成针对CD2AP的小干扰RNA，通过转染BGC-823、MGC-803等胃癌细胞改变CD2AP蛋白的表达情况；利用慢病毒构建可经诱导表达CD2AP基因的胃癌细胞MGC-Lv-CD2AP-HA。通过transwell试验和划痕愈合试验评估胃癌细胞的迁移与侵袭能力，CCK-8试验及克隆形成试验评估胃癌细胞的增殖能力。PI染色法评估胃癌细胞周期以及Annexin V/PI双染法检测胃癌细胞凋亡情况，系统性评估CD2AP基因对胃癌细胞体外生物学行为的影响。
3.免疫荧光试验（immunofluorescence）评估细胞骨架组装能力和细胞粘着斑数量，细胞粘附试验评估肿瘤细胞间黏附能力。免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）及Western Blot验证CD2AP与相互作用的蛋白CAPZA1。设计并合成针对CAPZA1的小干扰RNA，在胃癌细胞MGC-Lv-CD2AP-HA中，诱导CD2AP过表达同时敲低CAPZA1，初步探索CD2AP影响胃癌迁移能力的机制。
结果：
1.对564例胃癌患者的肿瘤组织标本及其中56例对应的癌旁正常组织标本进行免疫组织化学染色，统计后发现，不同组织类型的CD2AP表达显著不同。在配对组织样本中，弥漫型胃癌组织（n=15）中CD2AP的表达明显低于配对正常组织（P＜0.001）；然而，肠型胃癌组织（n=37）和混合型胃癌（n=4）组织之间的表达差异不显著（P＞0.05）。将620份组织标本分为弥漫型胃癌（n=337）、肠型胃癌（n=197）、混合型胃癌（n=30）和正常胃粘膜（n=56）。发现弥漫型胃癌中CD2AP的表达明显低于肠型胃癌、混合型或正常胃粘膜（P＜0.001），但肠型胃癌、混合型胃癌和正常胃粘膜之间没有显著性差异（P＞0.05）。
2.进一步分析了CD2AP表达与临床特征之间的关系。CD2AP表达量高低与胃癌患者的T期（p=0.044）、N期（p=0.038）、TNM期（p=0.041）、分化状态（p=0.001）、Lauren分型（P＜0.001）、Bowman型（p=0.022）和WHO病理型（p＜0.001）有显著相关性。Kaplan-Meier生存率分析表明，低表达CD2AP的胃癌患者的总生存率和无病生存率都更低。考虑到为弥漫型胃癌中CD2AP的表达明显低于配对正常组织，进一步分析了为弥漫型胃癌患者中CD2AP的表达，发现CD2AP是整体生存率以及无病生存率的独立保护因子。进一步对四个GEO胃癌数据集（GSE14208、GSE15459、GSE57303和GSE62254）和TCGA胃癌数据库进行了生存分析。结果表明，在以上数据库中，CD2AP表达水平较低胃癌患者预后更差。
3.在胃癌细胞BGC-803和MGC-823中调节CD2AP的表达情况，过表达CD2AP后，划痕愈合能力显著减弱（p＜0.05），transwell迁移和侵袭能力显著减弱（p＜0.05）；敲低CD2AP表达以后,划痕愈合能力增强（p＜0.05），transwell迁移和侵袭能力也显著增强（p＜0.05）。但在细胞中改变CD2AP表达后，细胞克隆形成和增殖能力无明显改变（p＞0.05），细胞周期无明显变化（p＞0.05），细胞凋亡情况也没有明显变化（p＞0.05）。
4.免疫荧光试验发现，过表达CD2AP之后，胃癌细胞的粘着斑数量明显增多，细胞骨架聚合能力增强。粘附实验证明增强CD2AP能增强细胞的粘附能力（p＜0.05），免疫共沉淀试验验证CD2AP和CAPZA1能直接相互作用，在胃癌细胞MGC-Lv-CD2AP-HA中，诱导CD2AP过表达同时敲低CAPZA1，CD2AP抑制细胞迁移的能力消失，增加粘着斑数量和促使细胞骨架聚合的作用也消失了，提示CD2AP通过ZAPZA1改变胃癌细胞的迁移能力。
结论：
1.CD2AP基因作为一个新发现影响胃癌转移的抑癌基因，能帮助能更好地预测胃癌患者的预后。
2.CD2AP通过与CAPZA1相互用，促进细胞粘着斑形成和促进细胞骨架组装，促进细胞间黏附来抑制影响胃癌转移。
3.该研究使更深入了解细胞骨架的调控机制，为提供了一种全新的干预细胞骨架调控的手段，为治疗胃癌患者提供新的潜在靶标。
1.检测CD2AP基因在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达情况，分析其与胃癌患者临床病理特征以及预后之间的关系。
2.探究CD2AP基因过表达和敲低对胃癌细胞体外生物学行为的影响。
3.探究CD2AP基因抑制胃癌细胞转移的机制。
方法：
1.收集564例胃癌患者的肿瘤组织标本及其中56例对应的癌旁正常组织标本，利用蛋白免疫印迹法（Western Blot）验证抗体特异性后，采用免疫组织化学染色法（Immunohistochemistry）检测胃癌和癌旁标本中CD2AP蛋白水平的表达差异情况。下载GEO数据库中的胃癌数据集，提取胃癌和癌旁CD2AP的mRNA表达情况。联系常见临床指标，病理分型以及患者预后生存情况，统计分析细胞骨架调节蛋白CD2AP与胃癌的相关关系。
2.构建表达CD2AP基因的质粒，设计并合成针对CD2AP的小干扰RNA，通过转染BGC-823、MGC-803等胃癌细胞改变CD2AP蛋白的表达情况；利用慢病毒构建可经诱导表达CD2AP基因的胃癌细胞MGC-Lv-CD2AP-HA。通过transwell试验和划痕愈合试验评估胃癌细胞的迁移与侵袭能力，CCK-8试验及克隆形成试验评估胃癌细胞的增殖能力。PI染色法评估胃癌细胞周期以及Annexin V/PI双染法检测胃癌细胞凋亡情况，系统性评估CD2AP基因对胃癌细胞体外生物学行为的影响。
3.免疫荧光试验（immunofluorescence）评估细胞骨架组装能力和细胞粘着斑数量，细胞粘附试验评估肿瘤细胞间黏附能力。免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）及Western Blot验证CD2AP与相互作用的蛋白CAPZA1。设计并合成针对CAPZA1的小干扰RNA，在胃癌细胞MGC-Lv-CD2AP-HA中，诱导CD2AP过表达同时敲低CAPZA1，初步探索CD2AP影响胃癌迁移能力的机制。
结果：
1.对564例胃癌患者的肿瘤组织标本及其中56例对应的癌旁正常组织标本进行免疫组织化学染色，统计后发现，不同组织类型的CD2AP表达显著不同。在配对组织样本中，弥漫型胃癌组织（n=15）中CD2AP的表达明显低于配对正常组织（P＜0.001）；然而，肠型胃癌组织（n=37）和混合型胃癌（n=4）组织之间的表达差异不显著（P＞0.05）。将620份组织标本分为弥漫型胃癌（n=337）、肠型胃癌（n=197）、混合型胃癌（n=30）和正常胃粘膜（n=56）。发现弥漫型胃癌中CD2AP的表达明显低于肠型胃癌、混合型或正常胃粘膜（P＜0.001），但肠型胃癌、混合型胃癌和正常胃粘膜之间没有显著性差异（P＞0.05）。
2.进一步分析了CD2AP表达与临床特征之间的关系。CD2AP表达量高低与胃癌患者的T期（p=0.044）、N期（p=0.038）、TNM期（p=0.041）、分化状态（p=0.001）、Lauren分型（P＜0.001）、Bowman型（p=0.022）和WHO病理型（p＜0.001）有显著相关性。Kaplan-Meier生存率分析表明，低表达CD2AP的胃癌患者的总生存率和无病生存率都更低。考虑到为弥漫型胃癌中CD2AP的表达明显低于配对正常组织，进一步分析了为弥漫型胃癌患者中CD2AP的表达，发现CD2AP是整体生存率以及无病生存率的独立保护因子。进一步对四个GEO胃癌数据集（GSE14208、GSE15459、GSE57303和GSE62254）和TCGA胃癌数据库进行了生存分析。结果表明，在以上数据库中，CD2AP表达水平较低胃癌患者预后更差。
3.在胃癌细胞BGC-803和MGC-823中调节CD2AP的表达情况，过表达CD2AP后，划痕愈合能力显著减弱（p＜0.05），transwell迁移和侵袭能力显著减弱（p＜0.05）；敲低CD2AP表达以后,划痕愈合能力增强（p＜0.05），transwell迁移和侵袭能力也显著增强（p＜0.05）。但在细胞中改变CD2AP表达后，细胞克隆形成和增殖能力无明显改变（p＞0.05），细胞周期无明显变化（p＞0.05），细胞凋亡情况也没有明显变化（p＞0.05）。
4.免疫荧光试验发现，过表达CD2AP之后，胃癌细胞的粘着斑数量明显增多，细胞骨架聚合能力增强。粘附实验证明增强CD2AP能增强细胞的粘附能力（p＜0.05），免疫共沉淀试验验证CD2AP和CAPZA1能直接相互作用，在胃癌细胞MGC-Lv-CD2AP-HA中，诱导CD2AP过表达同时敲低CAPZA1，CD2AP抑制细胞迁移的能力消失，增加粘着斑数量和促使细胞骨架聚合的作用也消失了，提示CD2AP通过ZAPZA1改变胃癌细胞的迁移能力。
结论：
1.CD2AP基因作为一个新发现影响胃癌转移的抑癌基因，能帮助能更好地预测胃癌患者的预后。
2.CD2AP通过与CAPZA1相互用，促进细胞粘着斑形成和促进细胞骨架组装，促进细胞间黏附来抑制影响胃癌转移。
3.该研究使更深入了解细胞骨架的调控机制，为提供了一种全新的干预细胞骨架调控的手段，为治疗胃癌患者提供新的潜在靶标。