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[目的] Avellino型角膜营养不良家系调查中发现,女性患者视力损伤比男性患者要严重。本研究分析17β雌二醇对人角膜上皮细胞SDHCEC1(Spontaneously derived human corneal epithelial cell line1, SDHCEC1)中TGFBI和Periostin蛋白表达的影响及两者间相互作用关系,探讨TGFBI和Periostin蛋白在Avellino型角膜营养不良中的作用机制。 [方法]将不同浓度(10-7、10-8、10-9、10-10 mol/L)17β雌二醇处理人角膜上皮细胞SDHCEC1,首先采用western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中TGFBI和Periostin的表达情况。其次10-7 mol/L与10-8 mol/L17β雌二醇处理人角膜上皮细胞SDHCEC1,免疫荧光单标和双标染色(immunocytochemistry,ICC)后,通过激光共聚焦显微镜观察 TGFBI和 Periostin蛋白在细胞中的定位(colocalization)及相互作用。最后应用免疫共沉淀检测在人角膜上皮细胞SDHCEC1中TGFBI和Periostin蛋白的相互作用。 [结果]1.western blot与qRT-PCR结果显示,不同浓度(10-7、10-8、10-9、10-10 mol/L)17β雌二醇处理人角膜上皮细胞 SDHCEC1后, TGFBI和Periostin表达呈现浓度依赖性升高(P<0.05)。 2.激光共聚焦结果显示,10-7 mol/L与10-8 mol/L17β雌二醇处理人角膜上皮细胞SDHCEC1后,ICC单标染色角膜上皮细胞中荧光强度随着17β雌二醇浓度升高而增加(P<0.05);而在双标染色中, TGFBI和Periostin蛋白分布于细胞质中,两者荧光存在明显共定位。 3.免疫共沉淀结果显示,anti-TGFBI抗体沉淀TGFBI蛋白时可以检测到Periostin蛋白的存在,TGFBI和Periostin蛋白在人角膜上皮细胞SDHCEC1中存在相互作用。 [结论]1.17β雌二醇呈浓度依赖性促进人角膜上皮细胞SDHCEC1中TGFBI和Periostin蛋白表达。 2.TGFBI和Periostin蛋白在人角膜上皮细胞SDHCEC1胞浆内表达,两者存在相互作用。