论文部分内容阅读
目的：类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一种以关节病变为主的慢性全身性自身免疫性疾病。临床主要表现为对称的多发性关节炎,以手、腕、足等关节最尝受累,早期以红、肿、热、痛和运动障碍为主,晚期可见关节软骨及骨质破坏,导致关节僵硬和畸形。焦树德教授经过多年中医临床实践,总结归纳经验,将RA命名为旭痹,并将RA相关的中医病因病机、证治等结合西医学的病生理创立了补肾祛寒治尪汤治疗RA,在临床上取得了很好的疗效。但此方的基础医学仍不完善,本研究试验和综述就从此方面出发。补肾祛寒治旭汤以补肾祛寒、疏风化湿、活血通络、强壮筋骨立法,焦老经过多年中医临床实践证明此方治疗RA有良好的效果。本试验对补肾祛寒治旭汤进行全方研究,造模(胶原诱导型关节炎模型)成功,观察补肾祛寒治旭汤各剂量组对CIA大鼠的治疗效果,并检测其对CIA大鼠骨组织及滑膜组织中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor, VEGF)水平及骨形态发生蛋白-2(Bone morphogenetic protein-2, BMP-2)水平的影响。综上所述研究目的就是：利用中西医结合的思维与方法,使中医临床疗效得到现代基础医学的证据支持,以初步明确补肾祛寒治旭汤的治疗作用原理；通过基础医学实验,研究补肾祛寒治尪汤全方剂量大小在治疗中的疗效有无差异,进而分析药物剂量与RA疗效的关系；通过实验结果,具体观察补肾祛寒治旭汤是否可以降低CIA大鼠VEGF的水平,和提高BMP-2的水平。方法：将74只Wistar雄性大鼠,随机分为正常对照组、模型组、甲氨喋呤组、补肾祛寒治旭汤稀释剂量组(小剂量组)、补肾祛寒治尪汤正常剂量组(中剂量组)和补肾祛寒治旭汤浓缩剂量组(大剂量组)。将牛Ⅱ型胶原溶于0.1mol/L醋酸溶液中,放入4℃冰箱过夜,按照2mg/ml的比例和弗氏完全佐剂1：1充分混和乳化。除了正常组不注射外,其余各组按照每只CIA大鼠200ug II型胶原的剂量注射,具体操作方法为于CIA大鼠尾根部位皮下注射抗原0.2ml;1周后再在尾根部位加强免疫一次,按照每只CIA大鼠100ug II型胶原的剂量,即按上述方法每只大鼠注射抗原0.1ml,此为胶原诱导关节炎大鼠模型造模过程。造模成功后,各不同剂量或不用药物组分别灌胃给药连续28天,1次/天,正常对照组给消毒饮用水灌胃28天,1次/天,观察药物对病变的治疗作用：观察大鼠的一般情况,着重观察大鼠关节炎指数积分,用药完成后,取大鼠膝关节部位的骨组织及滑膜,用荧光实时定量PCR技术测量BMP-2及VEGF的表达水平结果：1.与模型组相比,补肾祛寒治旭汤各剂量组和甲氨蝶呤组的关节炎指数积分均降低,且具有显著性差异(P<0.01)；与甲氨蝶呤组比较,中剂量组的关节炎指数积分明显降低,有统计学意义(P<0.05),而小剂量组与大剂量组的关节炎指数积分无明显差异(P>0.05)；中药组之间比较,中剂量组对关节炎指数积分降低效果最好,且与小剂量组和大剂量组相比具有有统计学意义(P<0.05)；与大剂量相比,小剂量组的效果比大剂量组偏好,但无差异(P>0.05)。2. BMP-2mRNA表达水平实验结果：模型组BMP-2mRNA表达增多,说明CIA大鼠机体在不用药情况下,也会积极产生BMP-2对骨损伤进行修复；与模型组相比,补肾祛寒治旭汤各剂量组和甲氨蝶呤组的BMP-2mRNA表达水平均增加,且中剂量组提高其表达效果最明显；与甲氨蝶呤组比较,中剂量组的BMP-2mRNA表达水平明显增高,表达量大约是甲氨蝶呤的两倍；甲氨蝶呤组、小剂量组和大剂量组的BMP-2mRNA表达水平差异不大；中药组之间,中剂量组对BMP-2mRNA表达水平的提高效果最好；小剂量组的效果比大剂量组偏好,但远不如中剂量组；大剂量组在三组中效果相对较差。3. VEGF mRNA表达水平实验结论：模型组VEGF mRNA的表达量与正常组相比,模型组表达明显升高,说明CIA大鼠造模较成功,而且VEGF表达量很大,可能表明此模型造模病变较严重；与模型组相比,各用药组均能降低VEGF mRNA的表达水平,其中中剂量组降低效果最明显,比其它三个用药组的效果都要好；甲氨蝶呤组、小剂量组和大剂量组降低VEGF mRNA表达的效果差异不大；中药组与甲氨蝶呤组比较,三个中药组降低VEGF mRNA表达水平均比甲氨蝶呤组效果好；三个中药组相比,中剂量组降低VEGF mRNA水平效果最好,大剂量组相对较差。结论：经实验结果分析,证明补肾祛寒治尪汤治疗胶原诱导型关节炎大鼠有较好的疗效,补肾祛寒治尪汤各剂量组均能够降低大鼠的关节炎指数积分；补肾祛寒治旭汤各剂量组均能够提高骨组织及滑膜组织中BMP-2的表达,均能降低骨组织及滑膜组织中VEGF的表达水平。将此实验结果和临床医学相结合,分析出补肾祛寒治旭汤治疗RA的机制可能是因为减少了VEGF的表达,而减少血管翳形成,减轻了对骨的破坏；同时提高了骨组织及滑膜组织中BMP-2的表达,从而增强了对骨的修复,促进骨损伤愈合;最终表现出整体的治疗效果,也就是我们可以观察到用药组大鼠的关节炎指数积分降低了。经过此实验,还可以看出疾病发展存在个体差异,不同剂量在治疗和预防方面可能各有优势,这有待进一步研究与创新；正确合理的药物剂量能增强其临床疗效,同时可减轻其不必要的毒副作用;从资源分配角度上分析,合理药量临床应用还能节省药物资源。补肾祛寒治旭汤可继续长期应用于临床,结合临床疗效仍可进一步完善其基础及临床研究。