FTO调控牦牛前体脂肪细胞增殖分化的机制研究

来源 :西北民族大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:funkfood
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牦牛(Bos grunniens)生长于高海拔,低氧,低温的特殊环境下,有着独特的能量代谢御寒体系,使之能在高寒极端的环境下生存下来。动物体内能量的储存主要来源于脂肪组织,脂肪组织可以调节体内能量储存与消耗平衡,在脂肪积累,脂质代谢和激素分泌等过程中起着关键作用。诸多研究表明肥胖相关蛋白(fat mass and obesity associated,FTO)可影响脂肪细胞增殖,促进脂肪细胞分化,但在牦牛上尚未报道,仍需进一步研究。本试验以大通牦牛前体脂肪细胞为研究对象,对FTO进行克隆分析,后采用q PCR技术对FTO基因在牦牛不同时期(18和30月龄)、不同组织(心,肝,脾,肺,肾,背最长肌和皮下脂肪)以及牦牛前体脂肪细胞诱导分化不同时期(0,4,8和12 d)的表达规律进行分析。以慢病毒介导的过表达技术和干扰RNA技术为手段,在细胞水平和分子水平探究FTO基因对前体脂肪细胞发育和脂质代谢的调控作用。通过转录组测序,筛选干扰FTO基因后的差异表达基因,初步探究FTO基因在牦牛脂肪细胞增殖分化和脂质代谢中的作用。主要得出以下结论:1.牦牛FTO基因克隆及表达分析牦牛FTO基因的编码区全长为1,518 bp,编码505个氨基酸。FTO基因在各组织中广泛表达,且在不同组织中差异显著。FTO基因在脂肪组织发育中的表达升高。牦牛前体脂肪细胞诱导分化后的FTO m RNA表达量逐渐下降。2.FTO促进牦牛前体脂肪细胞的增殖分化牦牛肾周脂肪细胞中,使用慢病毒感染过表达FTO基因,可促进脂肪细胞增殖与分化:脂肪细胞增殖活力呈增强趋势,Ed U阳性细胞的数量增加,细胞增殖相关基因CDK2与分化标志基因C/EBPα表达量显著上升(P<0.01)。过表达FTO可促进牦牛前体脂肪细胞中脂质的形成:脂肪细胞中脂滴的生成量增多,甘油三脂含量上升,脂肪合成代谢相关基因ACC、SCD、LPL、SREBF1表达量显著性高于对照组(P<0.01)。转染Si-FTO后,可抑制牦牛脂肪细胞增殖、分化以及细胞中脂质的沉积。3.转录组测序在牦牛脂肪细胞中干扰FTO基因,可显著抑制脂肪细胞增殖分化,将干扰FTO基因后的脂肪细胞与对照组细胞进行转录组测序,结果显示:共筛选出182个差异表达基因,其中有105个基因表达水平上调,77个基因表达水平下调,对差异基因GO分析和KEGG信号通路分析发现:部分差异基因富集在与脂肪增殖分化相关的核苷酸切除修复通路、味觉转导信号通路、鞘糖脂生物合成、PPAR通路等,在转录水平说明FTO基因对牦牛脂肪增殖和代谢有重要调节作用。
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